第一部分RLIM参与p53功能调控及其分子机制研究中文摘要P53通过转录调控靶基因表达,参与细胞周期阻滞、凋亡、衰老、DNA损伤修复、细胞代酣及自噬等重要过程。P53处于细胞对应激信号反应的调控网络核心位置,其蛋白水平及功能受到严密的调控。众多的P53调控子中,HDM2处于核心地位。HDM2可促进P53泛素化及蛋白酶体降解,还可直接抑制P53转录活性。调控HDM2稳定性及功能,对于细胞启动适合的p53反应极为重要。RLIM/RNF12为含有LIM结构域的转录辅因子,具有E3泛素化连接酶活性。RLIM参与转录因子及胞内蛋白稳定性和功能调控。本研究旨在探讨RLIM参与P53通路的调控及其分子机制。通过免疫共沉淀实验,发现RLIM在生理水平能够同P53及HDM2蛋白结合。体外转染、免疫印迹及定量PCR等实验发现过表达RLIM能够稳定p53蛋白,增强p53转录活性；而消减RLIM表达,p53蛋白水平减少,转录活性降低。RLIM能够特异性阻断HDM2对p53功能的抑制。RLIM能够阻断HDM2对p53的体内泛素化及降解。此外,RLIM也能促进HDM2体内泛素化及蛋白酶体降解,表明RLIM为新的HDM2的E3泛素化连接酶。环脂突变的RLIM可以激活p53通路及下游靶基因转录,表明RLIM对于p53功能的激活作用不依赖于其泛素化功能。采用PI标记及流式细胞仪检测发现,在肿瘤细胞诱导RLIM蛋白的微量过表达可以早期诱导G1期阻滞,后期出现凋亡反应。RLIM促进肿瘤细胞的凋亡依赖于细胞内功能性p53及HDM2蛋白表达。采用定量PCR法评估了RLIM在肝癌组织中表达情况,发现RLIM在肝癌组织中显著下调表达,与肝癌肿块大小相关。鉴定了RLIM为HDM2的E3泛素化连接酶,参与p53通路调控。初步阐释了RLIM参与p53通路调控的分子机制。加深了对p53调控机制的理解,为寻找针对p53通路的肿瘤治疗靶点提供了线索。第二部分氨基肽酶O在炎症性关节炎上调表达及其功能初步研究类风湿性关节炎（RA）是一种慢性系统性自身免疫性疾病。Ⅱ型滑膜细胞（FLSs）在类风湿性关节炎的慢性炎症的持续及关节破坏过程中处于核心的地位。增殖的FLSs分泌众多的炎症介质和金属蛋白酶,引起患者关节软骨和软骨下骨的破坏,最终导致其丧失活动能力。氨基肽酶参与到RA的发病和进展。本研究旨在探讨氨基肽酶O （APO）在RA及OA中的表达、调控及初步探讨APO参与RA发病的分子机制。通过定量PCR、免疫印迹及免疫组化明确APO在炎性关节炎的FLSs及组织原位的表达；应用各种促炎症介质刺激,采用定量PCR及免疫印迹法观察FLSs中APO表达的差异；通过免疫荧光技术决定了APO的亚细胞定位；采用双荧光素酶报告系统明确APO对各种炎症信号通路的激活。本研究发现,APO在RA及OA的FLSs中RNA及蛋白水平表达均高于来源于创伤患者的正常FLSs。APO在RA及OA的滑膜炎症组织中高度表达,主要表达在滑膜衬层,而在亚衬结构中表达较弱。APO在RA及OA的炎症滑膜细胞及血管内皮细胞的胞浆和胞核中均呈现高度表达。Toll样受体的配体如细菌脂蛋白（bLP）及多聚肌苷酸胞苷酸（PolyIC）可以诱导APO在FLSs中上调表达。APO的全长蛋白主要定位在细胞核中,其肽酶结构域及功能不影响其亚细胞定位。过表达APO、APO（?）太酶结构域缺失突变体（A99aa）及肽酶功能缺失的突变体（E480A）均能激活NFκB、AP1及HSE等参与炎症发生的重要信号通路。本研究发现炎症介质可以上调APO的表达,而过度表达的APO可以激活炎症通路,建立了一个新的促进RA疾病进展的正反馈环路,可能加速及恶化炎症进展及组织损伤。