【摘 要】
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[目的]基于文献调研及数据分析筛选出候选基因,验证其在肺腺癌中表达情况,并进行肺腺癌的易感性及临床相关性研究。[方法]本研究以人肺支气管上皮细胞Beas-2b、宣威肺癌细胞XWLC-05、人非小细胞肺癌细胞NCI-H1299、SPCA-1、A549以及云南省肿瘤医院肺癌组织及血清样本为研究模型:1、采用 qRT-PCR 验证候选基因（COL10A1、LAD1、IGSF9、AHNAK2、FAM111
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[目的]基于文献调研及数据分析筛选出候选基因,验证其在肺腺癌中表达情况,并进行肺腺癌的易感性及临床相关性研究。[方法]本研究以人肺支气管上皮细胞Beas-2b、宣威肺癌细胞XWLC-05、人非小细胞肺癌细胞NCI-H1299、SPCA-1、A549以及云南省肿瘤医院肺癌组织及血清样本为研究模型:1、采用 qRT-PCR 验证候选基因（COL10A1、LAD1、IGSF9、AHNAK2、FAM111B）在肺腺癌细胞上的逆转录水平,通过附带临床随访的肺腺癌cDNA芯片对候选基因进行组织逆转录验证进一步筛选差异基因;2、采用Western Blot实验技术验证差异基因在肺腺癌细胞上的蛋白表达情况;3、采用qRT-PCR和免疫组织化学染色法对云南省肿瘤医院肺癌组织进行差异基因的逆转录水平分析和蛋白水平分析;4、结合RNA纯化技术和qRT-PCR分子差异基因在云南省肿瘤医院肺腺癌血清样本的表达;5、生物信息学分析差异基因与肺腺癌的临床相关性及可能潜在的调控机制。[结果]1、与Beas-2b细胞株相比,LAD1、COL10A1、IGSF-9在其它四株肺癌细胞中逆转录水平上均存在一定的表达差异,且差异具有统计学意义（P<0.05）;LAD1、FAM111B、COL10A1在宣威肺癌细胞XWLC-05中存在明显的过表达（P<0.05）;LAD1、FAM111B、IGSF9、COL10A1在肺腺癌和肺腺癌旁组织芯片中均存在明显的基因过表达差异,而其中FAM11B呈现出11.4倍的过表达,且差异具有统计学意义（P<0.05）。2、在蛋白水平上,FAM111B在阴性对照Beas-2b细胞中几乎不表达,而在四株肺癌细胞株中均呈现出高表达,而在宣威肺癌细胞XWLC-05中更为显著（P<0.05）。3、在所选的51例肺癌患者（选自云南省肿瘤医院2018年12月-2020年2月的肺癌患者,其中:LUAD,n=25;SCLC,n=26）临床术后组织中,FAM111B在肺癌组织中呈现出8.5倍的逆转录过表达,且具有统计学差异（P<0.05）;而FAM111B在肺鳞癌组织中表达相对肺腺癌更高（P<0.05）。免疫组化结果显示,肺腺癌组织中FAM111B的的免疫得分IRS明显高于癌旁对照组（P<0.05）。4、经过对配对血清进行RNA纯化以后发现肺腺癌患者和非癌患者血清中均存在少量的游离RNA,以P53作为外参对照发现肺腺癌患者和非癌患者血清中并未发现FAM111B的逆转录表达。5、结合上述实验结果和临床肺腺癌患者病历以及生物信息学数据库对FAM111B与肺腺癌的关系进行生物信息学分析发现,FAM111B在Ⅱ、Ⅲ期肺腺癌患者表达相对Ⅰ、Ⅳ期较高,但两者不存在显著相关性;对随访病例进行分析,发现FAM111B 高表达的肺腺癌患者其术后生存时间显著下降（HR=1.49（1.26-1.75）,logrankP=2×10-6）。[结论]1、FAM111B在肺癌细胞的逆转录及蛋白水平上相对正常肺上皮细胞显著高表达,肺腺癌细胞中更为显著;2、FAM111B在肺腺癌组织中存在明显的逆转录和蛋白水平上调,但在其血清中并未检测到相应的游离RAN存在;3、生物信息学分析显示FAM111B是肺腺癌的术后生存风险因素,且与细胞凋亡和周期通路相关,有望作为作为临床肺腺癌术后生存指标。
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