【摘 要】
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目的:纯化人白细胞介素24的原核重组表达质粒pET-21a(+)-IL-24在大肠杆菌BL(DE3)中的表达产物rhIL-24,观察重组表达蛋白rhIL-24对胃癌细胞株SGC-7901体外生长的影响,并初步探
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目的:纯化人白细胞介素24的原核重组表达质粒pET-21a(+)-IL-24在大肠杆菌BL(DE3)中的表达产物rhIL-24,观察重组表达蛋白rhIL-24对胃癌细胞株SGC-7901体外生长的影响,并初步探讨其抗肿瘤作用可能的机制。方法:利用IPTG诱导原核表达载体pET-21a(+)-IL-24在大肠杆菌中表达IL-24,经纯化、复性后获取重组蛋白rhIL-24。将rhIL-24作用于人胃癌细胞株SGC-7901,四氮唑蓝(MTT)比色还原法检测rhIL-24对胃癌细胞体外生长的影响,流式细胞仪检测凋亡峰,免疫荧光染色观察细胞凋亡形态。逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)、免疫印迹法(Western Blotting)检测rhIL-24对胃癌细胞株SGC-7901中促凋亡因子bax表达的影响,鸡胚绒毛尿囊膜实验观察rhIL-24对血管生成的影响。结果:获得较高含量的重组蛋白rhIL-24。MTT法发现rhIL-24对体外培养的胃癌细胞株SGC-7901有明显的生长抑制作用,且呈时间、剂量依赖性,与阴性对照组相比差异有显著性(P<0.05)。rhIL-24蛋白30μg/ml作用于SGC-7901细胞24h后,流式细胞仪(FCM)检测结果显示有明显的凋亡峰出现,免疫荧光染色后显示染色质固缩,细胞核呈致密浓染或呈碎块状致密浓染,而阴性对照组没有凋亡峰出现,细胞的细胞核形态正常。RT-PCR、Western Blotting检测发现rhIL-24处理组(30μg/ml)胃癌细胞中促凋亡因子bax mRNA、蛋白表达增高,鸡胚绒毛尿囊膜实验发现rhIL-24处理组(30μg/ml)鸡胚绒毛尿囊膜二、三级血管数目明显
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