【摘 要】
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背景/目的:转化生长因子受体（TGFβ）能影响关节软骨的代谢稳态和结构的完整,而microRNA-140和ADAMTS-5在关节软骨的代谢中起着非常重要的作用,本文拟探究TGFβ/Smad3在OA软骨细胞中对microRNA-140调节ADAMTS-5表达的影响。方法:利用酶消化法体外提取SD大鼠（2-3周）的膝关节软骨细胞,通过显微镜下观察软骨细胞的生长基本形态和软骨细胞甲苯胺蓝染色来鉴定软骨细
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背景/目的:转化生长因子受体（TGFβ）能影响关节软骨的代谢稳态和结构的完整,而microRNA-140和ADAMTS-5在关节软骨的代谢中起着非常重要的作用,本文拟探究TGFβ/Smad3在OA软骨细胞中对microRNA-140调节ADAMTS-5表达的影响。方法:利用酶消化法体外提取SD大鼠（2-3周）的膝关节软骨细胞,通过显微镜下观察软骨细胞的生长基本形态和软骨细胞甲苯胺蓝染色来鉴定软骨细胞;通过IL-1的炎症诱导其成为OA软骨细胞。首先在OA软骨先报中通过质粒转染microRNA-140 mimics和microRNA-140 inhibit,并且使用ADAMTS-5抑制剂作为阳性对照组、空白组（标准培养基）和空质粒组分别于24、48、72小时用Real-time PCR分别检测ADAMTS-5的mRNA的表达,同时在72小时用Western blot检测ADAMTS-5的表达来验证microRNA-140对ADAMTS-5的调节;然后再通过在OA软骨细胞中分别加入Smad3激动剂（重组人Smad3蛋白）、Smad3抑制剂（SIS3）、阳性对照（ADAMTS-5抑制剂）和阴性对照（标准培养基）分别于24、48、72小时用Real-time PCR分别检测microRNA-140和ADAMTS-5的mRNA的表达,同时在72小时用Western blot检测ADAMTS-5的表达来验证Smad3在OA软骨细胞中对microRNA-140调节ADAMTS-5表达的影响。结果:1.软骨细胞为不规则的多角形,甲苯胺蓝染色结果胞质为浅蓝色,细胞核为深蓝色。2.Real-time PCR显示在OA软骨细胞中microRNA-140mimics组较microRNA-140inhibit组、阳性对照组（ADAMTS-5抑制剂）、空白组（标准培养基）合空质粒组明显降低ADAMTS-5 mRNA的表达（P<0.05）,并且在72小时Western blot显示microRNA-140mimics组较microRNA-140 inhibit组、阳性对照组（ADAMTS-5抑制剂）、空白组（标准培养基）和空质粒组明显降低ADAMTS-5的表达（P<0.05）。3.Real-time PCR显示在OA软骨细胞中Smad3抑制剂（SIS3）较Smad3激动剂（重组人Smad3蛋白）)、阳性对照（ADAMTS-5抑制剂）和阴性对照（标准培养基）在48和72h时microRNA-140的表达明显增高（P<0.05）,同时检测发现ADAMTS-5 mRNA的表达明显减低（P<0.05）,并且在72小时Western blot显示Smad3抑制剂（SIS3）较Smad3激动剂（重组人Smad3蛋白）)、阳性对照（ADAMTS-5抑制剂）和阴性对照（标准培养基）明显降低ADAMTS-5的表达（P<0.05）。结论:TGFβ/Smad3在OA软骨细胞中可以影响microRNA-140对ADAMTS-5的调节作用。
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