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银屑病是一种常见的慢性炎症性皮肤病,是由遗传因素、免疫因素、环境因素和心理因素等多种因素共同作用下产生的疾病。由于银屑病难以治愈、易复发,给患者带来了沉重的生理、心理和经济负担,严重影响了患者及其家庭的生活质量。银屑病治疗的传统药物具有一定副作用以及抗药性,靶向药物治疗效果较好,但由于其价格昂贵以及停药后反复发作,使得人们不得不继续寻找更加有效的治疗药物和新的作用靶点。角质形成细胞的过度增殖、异常分化以及过度的炎症反应是银屑病的主要病理特点,说明抑制角质形成细胞增殖和抗炎的药物可能对银屑病具有一定的治疗效果。没药甾酮(Guggulsterone,GS),[4,17-(20)-孕二烯-3,16-二酮],是从印度橄榄科植物没药树干皮分泌的油胶树脂中提取的主要活性成分之一,有E-GS和Z-GS两种异构形式。没药甾酮具有多种药理特点,在抗炎、抗氧化、降血脂和抗肿瘤等方面具有重要的作用。但没药甾酮在角质形成细胞中的作用及机制尚未得到阐明。因此,我们在本文中以人永生化角质形成细胞HaCaT细胞系作为主要研究对象,围绕没药甾酮在HaCaT细胞中的作用及相关机制进行了以下工作:1.利用CCK8、克隆形成实验证明没药甾酮能够抑制HaCaT细胞的增殖。EdU掺入实验表明没药甾酮可以引起HaCaT细胞DNA复制减少,Western blot实验表明没药甾酮可以抑制DNA复制相关蛋白MCM4和CDC6的表达水平。2.利用流式细胞术的方法检测了没药甾酮对HaCaT细胞周期的影响。结果发现,没药甾酮能够将HaCaT细胞阻滞在G2/M期,并能够使G2/M期相关蛋白CDC25C、CDK1的表达水平降低。3.通过Annexin-V/PI双染色实验,利用流式细胞术检测发现没药甾酮能够诱导HaCaT细胞发生凋亡。通过JC-1实验检测了线粒体膜电位的变化,彗星实验检测了对HaCaT细胞DNA损伤的影响以及通过ROS实验检测了没药甾酮对HaCaT细胞活性氧水平的变化。结果显示,没药甾酮能够诱导HaCaT细胞线粒体膜电位降低和DNA损伤,但对ROS水平没有影响。通过划痕愈合实验和Transwell实验证明了没药甾酮能够抑制HaCaT细胞的迁移能力。4.qRT-PCR检测了没药甾酮对HaCaT细胞银屑病相关炎症因子、趋化因子、抗菌肽以及细胞分化相关基因mRNA的影响,结果发现没药甾酮能够抑制促银屑病相关基因的表达,同时也能够抑制由M5混合细胞因子诱导的HaCaT细胞多种银屑病基因mRNA水平的高表达,如IL-6、S100A7/8/9、IVL等。5.我们还检测了银屑病相关的两个重要信号分子STAT和NF-κB的表达。Western blot结果表明,没药甾酮能够下调STAT3、STAT1和NF-κB蛋白的磷酸化水平,同时能够抑制p-JAK1的表达。双荧光素酶结果显示,没药甾酮能够抑制STAT3和NF-κB的转录活性。6.我们还探究了没药甾酮对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病模型皮损病理变化的影响。将12只BALB/C小鼠随机分为3组,对照组,咪喹莫特模型组,没药甾酮给药组,利用H&E染色和PASI评分评价小鼠背部皮损和右耳的严重程度,结果发现,与咪喹莫特模型组相比,没药甾酮组小鼠皮损严重程度显著减轻,PASI评分明显降低、表皮及右耳厚度明显降低。通过以上研究,我们得出以下结论:没药甾酮能够抑制HaCaT细胞的增殖和迁移能力,并诱导细胞凋亡。同时能够抑制HaCaT细胞促银屑病相关基因mRNA的表达,也能够抑制p-STAT3和p-p65的表达。此外,没药甾酮还能够减轻银屑病小鼠的皮损严重程度。这为进一步探究没药甾酮在角质形成细胞中的作用和分子机制提供了实验数据,为开发治疗银屑病新的药物提供了重要理论基础。