乳酸乳球菌是一种工业上常用的益生菌,其分泌产物是对人体无害的防腐剂Nisin,但是乳酸菌无论在自然环境中还是在发酵液中,随着其生长乳酸乳球菌将面临各种环境胁迫,尤其是菌体代谢产物使发酵液pH降低而形成不利的生长环境的矛盾。然而,低pH值环境下nisin的稳定性更高,因此菌株耐酸性能的提升可以间接提高nisin的产量。在乳酸菌的多种调控机制中,非编码小RNA是一种重要的调控因子。非编码小RNA(sRNA)在上级调控因子的信号的刺激下开始转录,转录产物并不与核糖体结合翻译成蛋白质,而是作为一段游离的RNA通过与相应的靶标mRNA结合的来影响靶标的翻译进程,从而达到相应的调控作用。本实验室基于RNA-sequencing分析,qRT-PCR筛选得到一系列候选sRNA,本研究基于northern blot杂交鉴定出乳酸乳球菌F44中的新sRNA:s015。s015可以提高菌株的耐酸性,且有益于低pH下的nisin的产量。通过三种靶标预测软件进行生物信息学预测,得到了sRNA s015的靶标基因库。对候选靶标进行统计分析,绘制韦恩图;对sRNA的结合位点进行统计学分析,得出结合位点分布概率图,从中挑选合适的靶标进行验证,验证得到atpG,busAB,cysD,ilvB,yudD,ywdA是sRNA s015的抑制靶标基因,tcsR,ung为sRNA s015的激活靶标基因。基于s015的保守性以及预测得到的靶标基因与s015结合位点集中于s015的特定保守区段(5’-GAAAAAAAC-3’),突变保守区域进行验证,证实该保守区是s015的调控核心区。通过对过表达靶标基因的菌株进行耐酸性检测和发酵实验,发现靶标基因atpG、busAB、ung和ilvB是酸刺激条件下耐受性相关的下游基因,ywdA可能是s015协同调控的下游基因。