阵列芯片实时荧光定量PCR基因表达分析

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随着现代医学及分子生物学的快速发展,实时荧光定量PCR技术在医学的基础研究及临床应用方面发挥着越来越大的作用。本论文基于自建的静态芯片PCR系统和激光诱导荧光检测平台,对CXCR-1表达基因进行了研究,初步展示所建系统在临床研究中的可用性。第一章介绍了基因工程的分子生物学基础及CXCR-1分析的意义,对PCR反应原理及定量PCR的发展情况进行回顾;特别对微流控分析系统和芯片上实时荧光定量PCR的临床应用进行了介绍。第二章以倒置显微镜为平台建立了基于半导体激光器(487/532nm)的共聚焦激光诱导荧光(LIF)检测体系,成功的对λDNA进行了扩增,并在此基础上针对CXCR-1进行了一系列条件的优化。第三章在第二章所优化的条件的基础上,在芯片上对依次稀释的不同浓度的CXCR-1进行扩增,并绘制标准曲线,同时在台式仪上进行同样浓度的扩增,分析所得的结果,结果表明在扩增相同浓度的样品时,芯片上的样品比台式仪上的提前进入指数期,即芯片上的扩增效率高于台式仪上,而且在芯片上扩增一次所用的时间为40min,在台式仪上扩增一次却要耗费1.5h,但在芯片上扩增一次只能得到标准曲线的一组数据,完成一组标准曲线数据所耗费的时间就比台式仪上的多了,为克服芯片上一次扩增只能得到标准曲线一组数据的缺陷,又进一步在芯片的基础上对平行试验进行了初步的探索,结果表明在芯片上具有进行平行实验的可行性。研究结果表明,所建立的系统在临床中有一定的实用价值,特别是通过并列检测的方法可以使分析的通量大大增高,作为便携式分析系统,在床边检测(POCT)中将有广泛的应用前景。
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