【摘 要】
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由青枯菌（Ralstonia solanacearum）引起的番茄青枯病是一种全株萎蔫的植物细菌性病害。青枯菌的致病因子非常复杂,其中酸性的胞外水解多糖EPS1是其重要毒力因子。在前期对两个致病力不同的番茄青枯菌菌株RsH和Rs M进行蛋白质组学分析发现,参与胞外多糖合成相关的蛋白eps C在菌株RsH和Rs M中的表达丰度存在差异,认为其可能与菌株生长代谢差异及致病力分化有关。因此,为进一步了解
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由青枯菌（Ralstonia solanacearum）引起的番茄青枯病是一种全株萎蔫的植物细菌性病害。青枯菌的致病因子非常复杂,其中酸性的胞外水解多糖EPS1是其重要毒力因子。在前期对两个致病力不同的番茄青枯菌菌株RsH和Rs M进行蛋白质组学分析发现,参与胞外多糖合成相关的蛋白eps C在菌株RsH和Rs M中的表达丰度存在差异,认为其可能与菌株生长代谢差异及致病力分化有关。因此,为进一步了解eps C在青枯病发生过程中可能的功能,为深入研究青枯菌的致病机制提供依据,本论文以强致病力青枯菌（RsH）、中致病力青枯菌（Rs M）及青枯菌模式菌株GMI1000为菌种材料,以番茄抗病材料Hawaii7996和感病材料M82为植物材料,通过比较3个菌株的生理特性、致病性和eps C的表达差异,研究该基因与青枯菌致病力的关系;进一步通过基因克隆和敲除,揭示其在青枯菌致病过程中的作用。主要研究结果如下:1.根据3个青枯菌菌株的表型特征观察,发现不同菌株在TTC培养基平板上的胞外多糖含量存在差异,菌株Rs M与GMI1000接近,但均多于RsH。2.致病性测定的结果显示,3个青枯菌菌株对番茄Hawaii7996和M82的致病性均表现出显著差异,其致病性强弱为:菌株RsH>GMI1000>Rs M。3.根据同源序列扩增获得了3个青枯菌菌株的eps C全长。3个菌株的eps C全长均为1128bp,编码376个氨基酸。序列分析发现,第683位碱基在eps CRsH和eps CGMI1000中为C,而在eps CRs M中突变为A,该位点的突变导致其编码的氨基酸序列由丙氨酸（A）突变为了谷氨酸（E）。4.通过荧光定量PCR测定eps C在菌株以及侵染后在植株内的表达情况。结果显示,eps C在菌株Rs M和GMI1000中的表达丰度无明显差异,在菌株RsH中的表达丰度显著低于Rs M;在入侵植物前期,3个菌株的eps C表达无显著性差异,而在侵染后期,无论是在番茄感病材料M82的茎还是根部,eps C的表达丰度均为Rs M>GMI1000>RsH。5.根据同源重组和融合PCR原理,构建了eps C缺失突变体RsH-Δeps C。突变体RsH-Δeps C菌株的生物学特性和致病性测定的结果显示,相较于野生型RsH菌株,突变体RsH-Δeps C菌株的胞外多糖含量明显减少,运动能力降低,生长较慢,弱化指数（AI）升高,侵染前期致病性降低,但在侵染后期不同突变体菌株均表现出致病性增强的现象。
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