不同柑橘种质果皮类胡萝卜素组成的评价及CgNSY的遗传转化

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jiangshan1017
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类胡萝卜素是影响柑橘类水果品质的重要代谢物。它不仅了决定了柑橘重要的感官品质——色泽,而且也是柑橘类水果的重要营养成分。柑橘果皮中含有多种类胡萝卜素,研究柑橘果皮类胡萝卜素的组成与含量,发掘类胡萝卜素积累特异的柑橘种质,对柑橘色泽品质改良有着重要的理论与实际应用价值。本研究收集了我国65个柑橘种质,分为克里曼丁橘、其他宽皮柑橘类、甜橙类、柚/葡萄柚类、杂柑类、大翼橙类、枸橼类以及其他柑橘种质8个种类,对每个种质果皮类胡萝卜素进行检测,并进行定性定量分析,建立了不同柑橘种质的果皮类胡萝卜素数据库,筛选出类胡萝卜素组成或者含量特异的种质,为柑橘类胡萝卜素的相关研究提供数据基础。此外,本研究还在烟草BY2(Nicotiana tabacum L.‘Bright Yellow 2’)悬浮细胞系和柑橘RM(Red Marsh grapefruit)愈伤组织中超表达了柚(Citrus Grandis)新黄质合成酶基因Cg NSY(Neoxanthin synthase),并克隆分析了Cg NSY基因的启动子序列,初步探索柚Cg NSY基因的功能。主要研究结果如下:1.在65个柑橘种质果皮中检测到了10种能够定性并定量的类胡萝卜素,包括八氢番茄红素、六氢番茄红素、叶黄质、β-隐黄质、β-胡萝卜素、β-柠乌素、紫黄质、9-顺式-紫黄质、黄体黄质以及新黄质。发现不同柑橘种类之间的类胡萝卜素总量差异较大,其中宽皮柑橘类种质的类胡萝卜素总量最高,甜橙次之,而柚/葡萄柚、枸橼与大翼橙中类胡萝卜素总量最少。β-柠乌素、六氢番茄红素和9-顺式-紫黄质是柑橘成熟果皮中最常见的类胡萝卜素。红橘、年橘、四季橘果皮中大量积累类胡萝卜素,而凤凰柚中类胡萝卜素总量极低。另外,莽山橘、日南一号、尤力克柠檬、黔江3号香橙与怀化宜昌橙在特定物质的积累上较同类其余种质有所不同。以上类胡萝卜素含量或种类特异的柑橘种质可作为研究类胡萝卜素合成相关基因表达调控的柑橘材料。2.以高班柚(GB)和HB柚(HB)c DNA为模板,克隆得到了柚新黄质合成酶基因Cg NSY,获得两条序列Cg NSY1与Cg NSY2,其主要差异为Cg NSY1在400bp处多54bp的碱基插入。随后构建了两者的超表达载体,分别转入烟草BY2悬浮细胞系与柑橘RM愈伤组织,并获得阳性愈伤,为Cg NSY功能的进一步探究提供材料。3.以8种柚为材料,克隆得到了10条Cg NSY基因的启动子序列,并进行了序列差异分析与转录因子预测,发现8个不同柚种质中,有7种柚的NSY启动子有两种,且其预测的转录因子的结合数目均有差异。因此推测启动子的差异可能是导致柚汁胞中类胡萝卜素组成和含量产生差异的影响因子之一。
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