【摘 要】
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春化作用是决定甜菜生长期和种植分布区域的重要因素之一,培育抗春化甜菜品种对实现北方早播和南方冬播以及提高甜菜和糖的产量具有重要意义。本研究主要采用生物信息学、转录组测序以及分子生物学实验相结合的手段探究在春化作用下调控甜菜抽薹和开花的转录因子。通过对甜菜KWS9147进行春化处理,农艺性状的测定、开花同源基因的系统发育分析以及qRT-PCR的鉴定,筛选调控甜菜抽薹和开花的关键基因。进一步进行RNA
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春化作用是决定甜菜生长期和种植分布区域的重要因素之一,培育抗春化甜菜品种对实现北方早播和南方冬播以及提高甜菜和糖的产量具有重要意义。本研究主要采用生物信息学、转录组测序以及分子生物学实验相结合的手段探究在春化作用下调控甜菜抽薹和开花的转录因子。通过对甜菜KWS9147进行春化处理,农艺性状的测定、开花同源基因的系统发育分析以及qRT-PCR的鉴定,筛选调控甜菜抽薹和开花的关键基因。进一步进行RNA-Seq,鉴定春化处理后的DEGs,利用WGCNA和plant TFDB确定与抽薹和开花关键基因有结合的转录因子,并对其进行分子验证。研究结果表明:(1)通过不同春化程度甜菜农艺性状BI、BD及开花相关基因表达模式,将甜菜春化过程分为3个阶段,即春化前(0 w)、春化不充足(0 w至10 w)和春化充足(10 w以后)。其中,BvGI和BvFVE1表达模式与BI和BD变化趋势具有一定的相关性,在春化不充足与春化充足阶段之间出现显著变化,且基因表达水平不随恢复室温培养发生显著变化,因此认为BvGI和BvFVE1参与调控甜菜春化作用。(2)通过对春化前(0 w)、春化不充足(2 w和6 w)和春化充足(10 w和14 w)的甜菜转录组进行测定分析,共鉴定到7586个DEGs,利用WGCNA将其分为18个共表达模块。plant TFDB进一步分析与BvGI和BvFVE1高度相关的共表达模块,共筛选出与BvGI有结合位点的3个转录因子,分别是BvLHY、BvCRF3和BvTCP4,以及与BvFVE1有结合位点的BvNLP7。(3)利用烟草瞬时转化系统,证明了BvLHY、BvCRF3、BvTCP4和BvNLP7均是核定位转录因子。酵母单杂交实验表明pHIS2-pro GI和pHIS2-pro FVE1重组载体的HIS3报告基因能在酵母细胞中表达,而共同转入转录因子并加入一定量的3-AT抑制剂后,HIS3报告基因在对照组能够表达,在实验组却无法表达,这说明BvLHY、BvCRF3和BvTCP4抑制了BvGI的表达,BvNLP7抑制了BvFVE1的表达。同时,我们也通过酵母单杂交启动子基序实验证明了BvCRF3是通过结合BvGI启动子区的WRE3基序来发挥抑制作用。这些结果为培育抗春化甜菜品种,实现甜菜春季早播和秋季晚收,提供重要理论基础和技术储备。
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