【摘 要】
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背景:类风湿关节炎是比较常见的自身免疫疾病之一,发病率较高,我国患类风湿关节炎的病人总数可能超过500万人,而且女性较为多见。临床类风湿关节炎主要累及双手小关节,是以慢性、不可逆转的破坏性多关节炎为主要表现的疾病,亦可累及周身多系统及脏器,或合并其他疾病,严重影响患者生活质量。且该疾病反复发作,目前尚无根治的方法,是临床的一大治疗难题。而最新的中国类风湿关节炎诊疗指南对类风湿关节炎设定的治疗目标为
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背景:类风湿关节炎是比较常见的自身免疫疾病之一,发病率较高,我国患类风湿关节炎的病人总数可能超过500万人,而且女性较为多见。临床类风湿关节炎主要累及双手小关节,是以慢性、不可逆转的破坏性多关节炎为主要表现的疾病,亦可累及周身多系统及脏器,或合并其他疾病,严重影响患者生活质量。且该疾病反复发作,目前尚无根治的方法,是临床的一大治疗难题。而最新的中国类风湿关节炎诊疗指南对类风湿关节炎设定的治疗目标为达标治疗,也就是目前无有效药物能根治类风湿关节炎。努力控制病情稳定、减少类风湿关节炎致残率,改善类风湿关节炎患者的生活水平,就是最终的治疗目的。因此,发掘研究新的医治方法和手段是临床工作者以及科研工作者的使命。胶原诱导性关节炎鼠模型是最常用来研究类风湿关节炎的动物模型。公认的诱导方法为使用牛二型胶原诱导DBA/1小鼠形成胶原诱导关节炎。但因为DBA/1小鼠的一些弊端,使其应用受限。此次实验采用鸡二型胶原诱导C57BL/6形成胶原诱导关节炎,也是为提供一个性价比更高的实验动物提供证据。槲皮素是一种具有生物活性的类黄酮,存在于蔬菜、水果、谷物和坚果中,还被发现也存在于红酒中。它具有抗炎、免疫抑制作用,可能对类风湿关节炎起到一定的治疗作用。在动物实验中证实槲皮素可以引起胶原诱导关节炎滑膜成纤维细胞凋亡,抑制滑膜细胞的增殖和新生血管形成、抑制破骨细胞的形成和骨吸收等作用;但具体作用机制不明。除此之外,流行病学以及动物实验等证实槲皮素对小鼠肠道菌群可以产生一定的影响,可调节肠道菌群失调状态,抑制有害菌的生长,改变肠道菌群的丰度,从而缓解相应临床症状,促进机体维持健康状态。实验目的:本实验旨在观察能否通过使用鸡Ⅱ型胶原诱导C57BL/6小鼠形成胶原诱导关节炎;验证槲皮素对小鼠胶原诱导关节炎的治疗作用,及其肠道菌群的影响。方法:选取6-8周龄的小鼠100只,随机选取10只为control组,余90只诱导关节炎模型。在诱导成功的小鼠中随机挑选20只小鼠,随机分为model组和treatment组。于第21天开始给予treatment组5mg/ml的槲皮素悬浊液0.2ml灌胃,control组以及model组给予0.2ml生理盐水灌胃作为实验对照。观察小鼠皮毛、精神状态、体重、足爪厚度、踝关节直径等并记录。实验结束离体脾脏、称重;剥取关节行病理检查;取清洁粪便,-80℃冰箱保存,行高通量测序。结果:（1）与control组相比,model组小鼠体重明显下降（p＜0.01）;足爪厚度明显增加（p＜0.01）;踝关节直径明显增加（p＜0.01）;脾脏重量明显增加（p＜0.01）,脾脏指数增加（p＜0.01）;关节炎指数明显增加（p＜0.01）。小鼠关节病理HE染色可见关节间隙变窄,大量炎性细胞浸润;滑膜组织增生,软骨及软骨组织破坏。（2）与model组相比,treatment组小鼠体重明显升高（p＜0.01）;足爪厚度明显减小（p＜0.01）;踝关节直径明显减小（p＜0.01）;脾脏重量明显减小（p＜0.01）,脾脏指数降低（p＜0.01）。关节炎指数明显降低（p＜0.01）。treatment组小鼠经过槲皮素治疗1月后,与model组小鼠相比,炎细胞浸润减少,关节狭窄、滑膜组织增生等情况较前好转。（3）菌群高通量测序结果示:model组小鼠特征性细菌为Alcaligenaceae和Bacteroides。而model组Firmicutes、Bacteroides、Actinobacteria、Bacteroidetes;Saprospirae、Lachnospiraceae等菌类较control组明显增加,而在槲皮素治疗后含量下降;另外,Proteobacteria、Alcaligenaceae在model组中升高,但经过槲皮素治疗后,未观察到其明显的降低;基于计算所得的alpha指数分析,model组小鼠较control组小鼠菌群复杂性降低。治疗以后,其复杂性接近正常。结论:使用鸡二型胶原诱导可以成功诱导C57BL/6小鼠形成胶原诱导关节炎。槲皮素对胶原诱导关节炎小鼠治疗作用明显。皮素能改变小鼠肠道菌群的组成丰度,这可能是槲皮素对胶原诱导关节炎小鼠治疗作用槲的机制之一。
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