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苦瓜为葫芦科苦瓜属植物苦瓜MomordicacharantiaLinnaeus的干燥近成熟果实，在我国又常被叫作锦荔枝、癫葡萄、凉瓜等，是传统的药食同源中药。《中华大辞典》记载苦瓜的根、茎、叶、花、果实、种子均可入药，《本草纲目》记载其可以解劳乏，除邪热，清心明目。味苦、寒，归心、脾、肝经，能够清暑涤热，明目，解毒。常被用于医治暑热烦渴，消渴，赤眼疼痛，痢疾，肠痈肿毒等。大量文献研究表明，苦瓜提取物能有效抑制肝癌细胞的生长，但其抗肝癌的药效物质基础目前还没有系统的研究报道。本论文在前期文献研究的基础上，通过多学科交叉的研究方法，对苦瓜醇提物进行分离纯化研究和有效成分分析，并对活性较好的组分进行了抗肝癌的作用机制研究。
目的：诠释苦瓜醇提物抗肝癌作用的药效物质基础和作用机制，以期为其抗肝癌的临床疗效提供现代科学依据，为开发研制创新中药或抗肝癌保健食品奠定基础。
方法：将新鲜苦瓜用乙醇提取，丙酮沉淀，得到苦瓜醇提物。以苦瓜中各活性成分的含量为指标，筛选出最佳的大孔吸附树脂对苦瓜醇提物进行初步纯化，利用液质联用技术(High performance liquid chromatograph-mass spectrometer, HPLC-MS)现代分析手段对大孔树脂纯化部位的有效成分进行分离鉴定，利用H22荷瘤小鼠为动物模型验证苦瓜醇提物和大孔树脂纯化部位对肝癌细胞抑制作用，并采用现代分子生物学研究技术，对醇提物中含量较高的活性成分进行抗肿瘤的作用机制研究。最后利用高效液相色谱对具有抗肝癌活性的产物进行进一步分离纯化研究并将其通过制备型高效液相色谱制备出来，将经过制备液相色谱分离得到的组分制备出来后采用HPLC-MS技术对其化学成分特别是氨基酸序列分别进行进一步的分析鉴定。
结果：本实验首先对苦瓜醇提物进行初步含量测定。含量测定结果表明，在醇提物中测得的所有活性成分中，含量最高的为多肽类成分，而皂苷类成分含量次之。因此我们以大孔吸附树脂吸附多肽类成分的含量和脱盐率为指标，筛选出DA201-C型大孔吸附树脂并对醇提物进行初步的纯化工作。经大孔吸附树脂纯化得到的大孔吸附树脂纯化部位(MCM)，多肽类成分的含量大量增加，达到了50%以上，而皂苷类成分的含量也有所增加，皂苷类成分的含量为8.1%。苦瓜醇提物和大孔吸附树脂纯化部位对H22荷瘤小鼠的抑瘤实验表明两者均具有一定的抗肿瘤作用(P<0.05)，且经过大孔吸附树脂纯化部位的抑瘤率较醇提物有明显提高(P<0.05)。HPLC-MS联用技术对大孔吸附树脂部位的多肽类成分进行分析鉴定，共检测出了来自苦瓜62种蛋白质的86种肽段。作用机制研究表明，大孔吸附树脂纯化部位能够增强Bax、caspase3的表达及降低Bcl-2、p-STAT3及PD-L1的表达，血清Elisa实验也表明大孔吸附树脂纯化部位的作用可以增加H22荷瘤小鼠血清TNF-α、IL-2水平，降低IL-6水平。用高效液相色谱对大孔树脂纯化部位进行进一步分离纯化得到了六个组分(P1-P6)，用BCA试剂盒进行含量测定确定其均为多肽类成分，且含量达到了98%以上，不足之处在于，这6个组分并不是单一成分，下一步的分离纯化还将围绕这一步进行。
结论：综合分析本论文的研究结果，发现苦瓜醇提物及大孔吸附树脂纯化部位均能有效抑制H22荷瘤小鼠肿瘤的增长，促进荷瘤小鼠肿瘤细胞发生凋亡而发挥抗肝癌作用。本研究还发现大孔吸附树脂纯化部位能通过Caspase-3/Bax/Bcl-2信号通路抑制H22肝癌细胞的增殖，同时提高小鼠体内TNF-α、IL-2水平，并抑制IL-6、PD-L1的表达，从而进一步促进肿瘤细胞的凋亡。通过抗肝癌活性成分的研究发现多肽类物质能够促使肿瘤细胞凋亡。本论文主要探讨了苦瓜醇提物抗肝癌作用的药效物质基础及作用机制，为苦瓜传统中药开发创新药物或保健食品奠定了一定的基础。
目的：诠释苦瓜醇提物抗肝癌作用的药效物质基础和作用机制，以期为其抗肝癌的临床疗效提供现代科学依据，为开发研制创新中药或抗肝癌保健食品奠定基础。
方法：将新鲜苦瓜用乙醇提取，丙酮沉淀，得到苦瓜醇提物。以苦瓜中各活性成分的含量为指标，筛选出最佳的大孔吸附树脂对苦瓜醇提物进行初步纯化，利用液质联用技术(High performance liquid chromatograph-mass spectrometer, HPLC-MS)现代分析手段对大孔树脂纯化部位的有效成分进行分离鉴定，利用H22荷瘤小鼠为动物模型验证苦瓜醇提物和大孔树脂纯化部位对肝癌细胞抑制作用，并采用现代分子生物学研究技术，对醇提物中含量较高的活性成分进行抗肿瘤的作用机制研究。最后利用高效液相色谱对具有抗肝癌活性的产物进行进一步分离纯化研究并将其通过制备型高效液相色谱制备出来，将经过制备液相色谱分离得到的组分制备出来后采用HPLC-MS技术对其化学成分特别是氨基酸序列分别进行进一步的分析鉴定。
结果：本实验首先对苦瓜醇提物进行初步含量测定。含量测定结果表明，在醇提物中测得的所有活性成分中，含量最高的为多肽类成分，而皂苷类成分含量次之。因此我们以大孔吸附树脂吸附多肽类成分的含量和脱盐率为指标，筛选出DA201-C型大孔吸附树脂并对醇提物进行初步的纯化工作。经大孔吸附树脂纯化得到的大孔吸附树脂纯化部位(MCM)，多肽类成分的含量大量增加，达到了50%以上，而皂苷类成分的含量也有所增加，皂苷类成分的含量为8.1%。苦瓜醇提物和大孔吸附树脂纯化部位对H22荷瘤小鼠的抑瘤实验表明两者均具有一定的抗肿瘤作用(P<0.05)，且经过大孔吸附树脂纯化部位的抑瘤率较醇提物有明显提高(P<0.05)。HPLC-MS联用技术对大孔吸附树脂部位的多肽类成分进行分析鉴定，共检测出了来自苦瓜62种蛋白质的86种肽段。作用机制研究表明，大孔吸附树脂纯化部位能够增强Bax、caspase3的表达及降低Bcl-2、p-STAT3及PD-L1的表达，血清Elisa实验也表明大孔吸附树脂纯化部位的作用可以增加H22荷瘤小鼠血清TNF-α、IL-2水平，降低IL-6水平。用高效液相色谱对大孔树脂纯化部位进行进一步分离纯化得到了六个组分(P1-P6)，用BCA试剂盒进行含量测定确定其均为多肽类成分，且含量达到了98%以上，不足之处在于，这6个组分并不是单一成分，下一步的分离纯化还将围绕这一步进行。
结论：综合分析本论文的研究结果，发现苦瓜醇提物及大孔吸附树脂纯化部位均能有效抑制H22荷瘤小鼠肿瘤的增长，促进荷瘤小鼠肿瘤细胞发生凋亡而发挥抗肝癌作用。本研究还发现大孔吸附树脂纯化部位能通过Caspase-3/Bax/Bcl-2信号通路抑制H22肝癌细胞的增殖，同时提高小鼠体内TNF-α、IL-2水平，并抑制IL-6、PD-L1的表达，从而进一步促进肿瘤细胞的凋亡。通过抗肝癌活性成分的研究发现多肽类物质能够促使肿瘤细胞凋亡。本论文主要探讨了苦瓜醇提物抗肝癌作用的药效物质基础及作用机制，为苦瓜传统中药开发创新药物或保健食品奠定了一定的基础。