【摘 要】
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致病性感染是全世界病原体疾病高发病率和死亡率的主要原因。许多传染病很难用现有的常规治疗方法治愈,因而需要尝试新的方法来提高对耐药病原体的治疗效果。甲型流感病毒致病性高、普遍易感、呈季节性,并由于其抗原变异性,曾多次引起世界性大流行。较于抗体,核酸适配体作为新一代亲和试剂,有着其独特的优势,可用于流感病毒的识别及抑制。目前,甲型流感病毒亚型多,针对各亚型的核酸适配体太少,缺乏一种能识别一种或多种亚型
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致病性感染是全世界病原体疾病高发病率和死亡率的主要原因。许多传染病很难用现有的常规治疗方法治愈,因而需要尝试新的方法来提高对耐药病原体的治疗效果。甲型流感病毒致病性高、普遍易感、呈季节性,并由于其抗原变异性,曾多次引起世界性大流行。较于抗体,核酸适配体作为新一代亲和试剂,有着其独特的优势,可用于流感病毒的识别及抑制。目前,甲型流感病毒亚型多,针对各亚型的核酸适配体太少,缺乏一种能识别一种或多种亚型的核酸适配体。因而,发展一种能快速、高效、便携、普适的诊断方法或寻找一种试剂能够抑制病毒感染,对预防和控制病毒性疾病感染具有重要科学意义。微流控芯片将试剂的的采样、稀释、反应、分离、检测等过程集成在整个芯片上,较传统实验室的实验流程,更加集成化,可短时间分析几百个样品。其次在微米尺度上控制流体流动,达到与宏观尺度不同的特殊性能。并且微流控芯片消耗试剂与样品极少,处理样品低至μL,节约了样品和试剂,降低了成本。在微流控芯片引入磁场调控,丰富了微流控芯片的应用范围。磁控微流控芯片由于其便携化、集成化、高通量等优势,在生物、化学和医学等领域具有巨大应用潜力。本课题组长期以来一直致力于磁控微流控芯片的构建及其在生物医学领域的应用。本论文基于磁控微流控芯片构建了多靶标核酸适配体筛选平台,并用于流感病毒的抑制。具体开展以下工作:基于磁控微流控芯片构建了一种多靶标普适性和特异性的核酸适配体筛选方法。设计了并联芯片,集成多重正筛单元,可筛选出识别多种靶标特异性的核酸适配体。设计了串联芯片,集成多重负筛单元,提高筛选的特异性,可筛选针对流感病毒特异性识别的核酸适配体。串并联芯片的联用,发展了一种多靶标筛选的新方法,有望获得对多种病毒共同识别的核酸适配体以及各自特异性识别的核酸适配体。串并联芯片联用,仅需2轮筛选,就能获得针对H5N1、H7N9、H9N2三种流感病毒HA蛋白高亲和力和高特异性的核酸适配体。针对三种流感病毒的核酸适配体解离常数均在纳摩尔范围。筛选出流感病毒特异性的适配体,可进一步进行流感病毒的识别,并能一定程度抑制流感病毒侵染。此多靶标微磁筛选平台为多种靶标核酸适配体筛选提供了一个可行且高效的方法。此核酸适配体有望发展成为一种病毒抑制剂,为临床诊断与治疗研究提供新的手段。
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