circ_0001658在胃癌中的作用及机制研究

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研究背景:胃癌是严重危害人类健康的一种恶性肿瘤,其发病机制仍不明确。环状RNA(circ RNA)是近年来的研究热点,参与多种类型的疾病进程,在肿瘤的致病中发挥重要作用。目前circ RNA在胃癌中的表达及意义的研究仍十分有限,因此进一步研究胃癌中circ RNA的表达差异及在肿瘤发生发展中的作用具有重要的意义。研究方法:本研究通过生信分析筛选在胃癌组织中有显著性差异的circ RNA,并使用实时逆转录聚合酶链反应(RT-q PCR)的方法在正常人胃上皮细胞GSE-1和胃癌细胞系AGS及HGC27细胞中验证候选circ RNA的表达情况。通过对胃癌细胞进行干扰RNA转染从而敲减circ_0001658的表达水平,CCK-8法检测细胞的增殖情况,流式细胞技术检测细胞的凋亡情况,免疫荧光染色法检测自噬相关蛋白LC3和p62的表达情况。随后Western Blot检测Caspase-3、Bax和Bcl2蛋白水平。通过在线生物信息学网站预测circ_0001658与mi R-182及其靶基因RAB10的结合位点并通过双荧光素酶基因报告和RNA下拉实验进一步验证。通过对mi R-182及RAB10的表达干扰,反向验证circ_0001658的作用。此外,我们通过体内实验建立胃癌细胞裸鼠种植瘤,从瘤重和体积两个方面评价体内敲减circ_0001658后对肿瘤的作用。研究结果:通过生物信息学分析,证实circ_0001658在胃癌组织中表达异常,并在体外AGS和HGC27胃癌细胞株上表达明显高于胃上皮细胞GSE-1。敲低circ_0001658表达后,AGS和HGC27细胞活力被抑制的同时,凋亡速率提高。此外,下调circ_0001658可抑制胃癌细胞自噬。双荧光素酶基因报告和RNA下拉实验结果表明mi R-182为circ_0001658的靶基因,RAB10为mi R-182的下游靶基因。在AGS和HGC27细胞中,circ_0001658和RAB10表达上调,mi R-182表达抑制。下调mi R-182可逆转si-circ_0001658对胃癌细胞在细胞活力、凋亡和自噬功能的影响。此外,上调RAB10可以中和mi R-182对胃癌细胞活力、自噬和凋亡的影响。研究结论:circ_0001658在胃癌细胞中异常上调,敲低circ_0001658可通过mi R-182/RAB10信号通路显著抑制胃癌细胞的生长,促进胃癌细胞的凋亡,抑制胃癌细胞自噬的激活。因此,circ_0001658可能是潜在的胃癌治疗靶点。
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