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人源诺如病毒（Human Norovirus,HuNoV）是造成全球范围内各年龄段急性胃肠炎的主要病原体之一。成熟的体外培养体系或小动物感染模型的缺乏,极大地阻碍了对病毒感染机制的研究,目前仍没有上市的疫苗或特异性药物。病毒样颗粒（Virus-Like Particle,VLP）与天然的病毒粒子在形态大小和抗原性等方面都极为相似,因此被作为研究Hu No V疫苗和蛋白机制等领域的良好替代品。次衣壳蛋白（Minor Capsid Protein,VP2）在蛋白机制中扮演着重要的角色,但与主衣壳蛋白（Major Capsid Protein,VP1）相互作用的具体机制还未见报道,因此加强对VP2蛋白的研究有利于病毒机制的解析。Hu No V具有丰富的遗传多样性,系统掌握不同基因型间蛋白互作关系很有必要。本研究结合团队前期对广州本地Hu No V流行病学监测,构建了VLP抗原库,选取了广州本地Hu No V重要基因型VLP作为研究对象,对其免疫原性和受体结合能力进行了系统评价,考查了次衣壳蛋白VP2对VLPs稳定性影响,借助酵母双杂交技术对Hu No V不同基因型之间主次衣壳蛋白互作关系进行了研究。具体结果如下:（1）人源诺如病重要基因型病毒样颗粒的制备与评价。选取广州地区急性腹泻患者中分离的毒株（GZ2013-L10和GZ2013-L20）作为研究对象,成功构建重组杆状病毒载体Bacmid-ORF2,在昆虫细胞sf9中表达了VLP,并通过超离纯化获得完整的VLP。电镜结果表明颗粒直径约30 nm,SDS-PAGE和Western Blot显示蛋白相对分子质量约58 k Da;唾液受体结合试验结果表明两种毒株VLP能与分泌型组织血型抗原（Histo-Blood Group Antigen,HBGA）受体和猪胃黏蛋白（Porcine Gastric Mucin,PGM）均能结合,其中毒株GZ2013-L20还能与非分泌型HBGA受体结合。免疫小鼠获得的多克隆抗体效价在105以上。VLP多克隆抗体的交叉反应结果显示,只有毒株GZ2013-L20表现出与Hu No V大多数基因型（20/28）P颗粒蛋白结合的广谱性,但它们的交叉阻断试验结果显示,均只对同型VLP具有中和阻断效果,而对不同型别VLP（包括GII.8、GII.17、GII.2和GII.3/GII.4型）无中和效果。（2）次衣壳蛋白VP2对病毒样颗粒稳定性影响。选取GII.4和GII.17型毒株作为研究对象,成功构建杆状病毒载体Bacmid-ORF2和Bacmid-（ORF2+ORF3）,制备了不含VP2蛋白的VLP和含VP2蛋白的VLPs,电镜结果表明VLPs直径约30 nm,SDS-PAGE和Western Blot显示VP2蛋白的相对分子质量约29 k Da;VP1蛋白与VP2蛋白共转染sf9细胞后蛋白表达量均高于单独转染（VP1/VP2）后的蛋白表达量。VLP和VLPs经反复冻融后进行免疫原性和受体功能验证,结果表明GII.4型与GII.17型VLP分别在冻融17次和19次后仍具备免疫原性和受体结合功能,而含有VP2蛋白的VLPs在多冻融2次后还具备免疫原性及受体结合功能。（3）人源诺如病毒不同基因型之间主次衣壳蛋白互作机制研究。选取14种基因型（常见基因型:GI.1、GII.3、GII.4和GII.17,非常见基因型:GI.5、GI.8、GI.9、GII.1、GII.2、GII.5、GII.8、GII.10、GII.20和GII.21）构建了酵母表达载体p GADT7-ORF2和p GBKT7-ORF3。自激活和毒性验证结果显示诱饵蛋白不具有自激活现象,并且与空载相比对酵母生长抑制作用均不明显。基于ORF2和ORF3区域的系统进化分析结果大致相同。交叉互作试验结果显示,14种毒株之间主次衣壳蛋白存在相互作用,其自身蛋白的互作能力强于不同毒株间的交叉互作能力（p值为0.0022）。在GI基因群内均具有相互作用,GII基因群内大部分有相互作用,而GI与GII基因群之间的交叉互作结果差异明显,并且相同基因群内的蛋白互作能力强于不同基因群之间的蛋白互作能力（p值为0.043）。在常见基因型中GII.17型作为诱饵蛋白时互作能力均较弱（p＜0.0001）,亲缘关系较近的毒株所表现出的蛋白互作关系大致相同。值得注意的是GII.4型广州珠GZ2013-L10无论是作为诱饵蛋白还是猎物蛋白,除个别基因型外均有相互作用。综上所述,本研究制备并系统表征了HuNoV重要基因型VLP的受体功能和免疫原性特征,为多价VLP疫苗研发毒株的选择及进化规律的探索提供了必要的基础数据。考查了VP2蛋白具备增加衣壳蛋白表达量和提高VLP抗冻融能力,为机制研究和疫情防控提供了新的途径。借助酵母双杂交技术验证了不同基因型之间主次衣壳蛋白具有相互作用,并掌握了蛋白间的互作关系,为挖掘蛋白互作的关键氨基酸位点提供了理论基础。