【摘 要】
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肥胖是一种由过量脂肪组织积累造成的疾病,是许多临床疾病的诱发因素。肥胖发生过程中脂肪组织的扩张通过脂肪细胞肥大和脂肪细胞增生而发生,涉及脂肪前体细胞募集,增殖和分化。Adra1a基因编码多通路跨膜蛋白,在蛋白磷酸化的正调控、平滑肌收缩的调节以及动脉血压的调节中发挥作用,我们在前期的研究中发现Adra1a可以促进白色脂肪组织棕色化,但其在白色脂肪细胞分化过程中的作用和机制尚不明确。本研究以小鼠白色脂
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肥胖是一种由过量脂肪组织积累造成的疾病,是许多临床疾病的诱发因素。肥胖发生过程中脂肪组织的扩张通过脂肪细胞肥大和脂肪细胞增生而发生,涉及脂肪前体细胞募集,增殖和分化。Adra1a基因编码多通路跨膜蛋白,在蛋白磷酸化的正调控、平滑肌收缩的调节以及动脉血压的调节中发挥作用,我们在前期的研究中发现Adra1a可以促进白色脂肪组织棕色化,但其在白色脂肪细胞分化过程中的作用和机制尚不明确。本研究以小鼠白色脂肪细胞为研究对象通过体外成脂诱导和Adra1a基因过表达技术,探究Adra1a对白色脂肪细胞成脂分化的影响及其作用机制。结果如下:1、白色脂肪细胞的分离培养及鉴定利用胶原酶消化法分离小鼠白色脂肪细胞,用含10%FBS的DMEM培养液培养,细胞形态呈典型的成纤维细胞样形态,油红O染色后可观察到成熟脂肪细胞内出现许多单泡脂滴,证明本研究分离得到的是典型白色脂肪细胞。2、Adra1a在白色脂肪细胞成脂分化过程中的表达变化对白色脂肪细胞进行成脂分化,在分化的第2天、4天、6天和8天收集白色脂肪细胞,通过RT-q PCR和Western Blot检测Adra1a在成脂分化过程中的表达变化,发现Adra1a的表达量随着分化时间的延长而降低。3、Adra1a过表达载体的转染效率及其对细胞活性的影响构建Adra1a过表达载体,利用脂质体转染法将Adra1a过表达载体转染到白色脂肪细胞中,检测转染效率发现该过表达载体可以使Adra1a的表达提高24.8倍。利用CCK-8检测Adra1a过表达对白色脂肪细胞活性的影响,发现转染Adra1a过表达载体后对细胞活性没有显著影响。4、Adra1a过表达对白色脂肪细胞成脂分化的影响在白色脂肪细胞中转染Adra1a过表达载体并进行成脂诱导,通过RT-q PCR和Western Blot检测成脂诱导相关基因表达量的变化,结果发现成脂标志基因PPARγ在转录及蛋白水平表达量显著下调。利用油红O染色及脂滴定量检测Adra1a过表达后白色脂肪细胞的成脂情况,发现Adra1a过表达可抑制白色脂肪细胞成脂分化过程脂滴积累。5、Adra1a对白色脂肪细胞分化信号通路的影响转染Adra1a过表达载体后,检测白色脂肪细胞分化后AMPK和ERK/MAPK及其磷酸化水平的变化,结果发现,Adra1a过表达后AMPK水平变化不大,但其磷酸化水平明显提高。而ERK的表达水平也无变化,其磷酸化水平也明显提高。证实Adra1a可能通过提高AMPK和ERK通路的磷酸化水平来抑制白色脂肪细胞的分化。
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