【摘 要】
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目的:探究miR-133a-3p与GCH1基因的靶向关系,及其调控小胶质细胞炎症反应的功能作用。方法:利用targetscan、Starbase等生信预测网站及venny在线数据库筛选GCH1上游miRNA（miR-133a-3p）及结合位点,并通过Western blot及双荧光素酶报告实验探究两者靶向关系;利用脂多糖构建体外模型,并通过q RT-PCR、ELISA等方法检测BV-2细胞中miR
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目的:探究miR-133a-3p与GCH1基因的靶向关系,及其调控小胶质细胞炎症反应的功能作用。方法:利用targetscan、Starbase等生信预测网站及venny在线数据库筛选GCH1上游miRNA（miR-133a-3p）及结合位点,并通过Western blot及双荧光素酶报告实验探究两者靶向关系;利用脂多糖构建体外模型,并通过q RT-PCR、ELISA等方法检测BV-2细胞中miR-133a-3p、GCH1、IL-6、IL-1β的相对表达量;对BV-2细胞进行miR-133a-3p mimic过表达处理,q RT-PCR检测miR-133a-3p、GCH1及炎症因子的相对表达量;对BV-2细胞进行GCH1慢病毒敲低/过表达处理,利用q RT-PCR、ELISA法检测miR-133a-3p靶向GCH1基因对炎症因子表达的调控作用。结果:相比较Con组,LPS诱导的BV2细胞内IL-1β和IL-6表达量明显增加,且miR-133a-3p的表达显著减少,差异有统计学意义（P＜0.05）;相比较NC组,q RT-PCR、ELISA结果显示过表达miR-133a-3p抑制BV-2细胞炎症模型中IL-6、IL-1β的表达,差异有统计学意义（P＜0.05）;通过Targetscan和starbase预测发现GCH1的3,UTR中含有与miR-133a-3p互补的核苷酸序列,进一步双荧光素酶报告实验结果表明,在转染WT-GCH1的BV-2细胞中,同时转染NC组与转染miR-133a-3p组相比,后者荧光素酶活性明显下降（P＜0.001）,相反,在转染MUT-GCH1的BV-2细胞中,同时转染NC组与转染miR-133a-3p组相比,两者荧光素酶活性无明显变化。而且过表达miR-133a-3p,可以降低BV2细胞中GCH1的表达;q RT-PCR、Western blot检测结果显示miR-133a-3p能够明显减少GCH1蛋白水平及m RNA水平的表达量（P＜0.05）;相比较NC组,sh-GCH1组GCH1表达量明显减少,且q RT-PCR和ELISA检测结果显示sh-GCH1组BV-2细胞中IL-1β和IL-6的相对表达量明显减少（P＜0.05）;相比较NC组,OE-GCH1组细胞中GCH1表达量明显增加,且q RT-PCR和ELISA检测结果显示OE-GCH1能部分逆转miR-133a-3p对BV-2细胞炎症因子IL-1β、IL-6表达的下调,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:体外实验表明miR-133a-3p对BV-2小胶质细胞炎症反应具有调控功能,miR-133a-3p能通过靶向结合GCH1进而抑制LPS诱导的小胶质细胞炎症因子上调,本研究有助于进一步揭示miR-133a-3p在神经炎症中的潜在调控功能及分子作用机制。
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