牛奶子（Elaeagnus umbellata Thunb.）果实富含人体所需多种氨基酸、矿质元素、维生素、必需脂肪酸、类黄酮、番茄红素等物质,是一种极具开发潜力的天然抗氧化剂和营养补充剂。它不仅可作为水果直接食用,而且其提取物更具抗癌等药用价值,同时还有可能成为番茄的替代品用于工厂化生产番茄红素,综合开发利用前景广泛。由于牛奶子是野生植物,对其果实的生长发育尚不了解。为此,我们以Bio-Rad高通量双向电泳系统为技术平台,通过改进和优化牛奶子果实蛋白的提取方法及电泳条件,首次建立了一套适合牛奶子果实总蛋白的高分辨率和重复性好的双向电泳体系,用以研究牛奶子果实成熟过程蛋白组变化,结合相关有机物的测定,来探讨果实成熟的分子机制。此后,我们从上调蛋白中选择了一个萜类物质合成的关键酶——异戊烯焦磷酸异构酶（IPI）,克隆得到了基因全长。结果如下：1.用酚法提取蛋白时,适当延长第2次平衡时间,并及时更换平衡缓冲液Ⅱ,可获得高分辨率的总蛋白图谱。这种改良了的方法解决了牛奶子果实中富含的色素和多酚等次生代谢物对双向电泳（2-DE）的干扰问题,重复性好,适用于果实中蛋白的2-DE分析和尔后的技术操作。2.果实成熟是一个复杂的生理生化过程,包括糖类合成、有机酸代谢和类胡萝卜素积累等。在成熟的牛奶子果实中,葡萄糖和果糖为主要糖存在形式；苹果酸为最丰富的有机酸；番茄红素含量高达2345μg/g干重,相当于传统番茄的17倍。利用2-DE技术筛选出63个上调表达蛋白,采用串联质谱技术成功鉴定出其中的43个,38个已知功能蛋白参与果实糖代谢、柠檬酸循环、萜类物质合成、抗氧化、抗胁迫、脂肪酸合成以及蛋白自身合成与降解。这些果实成熟过程中上调表达蛋白可能对牛奶子果实品质形成发挥重要的作用。3.牛奶子果实IPI基因长1185 bp,具有一个705 bp的完整开放读码框,编码235个氨基酸。IPI在果实成熟过程中表达上调了3倍,可能与其牛奶子果实中番茄红素的大量积累有关。