果蝇Rgn蛋白多克隆抗体制备及其在天然免疫中的作用

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天然免疫作为多细胞生物阻止外界微生物入侵的第一道防线,在机体防御机制中具有十分重要的作用。与哺乳动物相比,黑腹果蝇{Drosophila melanogaster)的天然免疫系统没有与之相似的B淋巴细胞及T淋巴细胞,也没有能够专一识别病原微生物的特异性免疫系统,但其能够对微生物感染迅速而有效地应答,说明果蝇具有能够抵抗病原微生物入侵的高效的固有免疫系统。目前的研究结果表明,果蝇体内存在着三种主要的天然免疫方式:分别是通过脂肪体产生的抗菌肽来达到防御目的体液免疫,依靠浆细胞吞噬和包裹作用的细胞免疫,以及通过产生的黑色素沉积在伤口并杀伤病原体的黑化反应。再生蛋白(Regeneration, Rgn)是C型凝集素(C-type lectin)超家族成员之一,由一段信号序列和C型钙离子依赖性凝集素结构域(C-type Ca2+-dependent lectin domain, CTLD)组成,是rgn基因的编码产物。研究表明,Rgn蛋白对于个体发育、组织再生和创伤修复具有重要作用。其参与果蝇生长发育的各阶段,是果蝇生长发育中不可或缺的重要蛋白之一。因Rgn蛋白在果蝇生长发育中的重要作用以及rgn基因所含有的特殊的C型凝集素结构域,推测其可能也参与了果蝇的天然免疫反应。本实验通过比较野生型WT(W1118)与rgn缺陷型果蝇(rgnRNAi)腹腔注射白假丝酵母菌孢子后生存率的变化认识到由于Rgn蛋白的缺失,造成机体抵御真菌的能力明显减弱;血细胞含量的比较实验中出现血细胞数量明显升高的现象;此外,在生长状态的比较中也观察到了全身低表达蛹期致死及翅原基低表达导致翅脉异常发育的现象。这都说明由于Rgn蛋白的缺失导致果蝇机体出现了部分天然免疫功能的改变。同时本实验对rgn缺陷型果蝇细胞的吞噬能力、细胞膜肌动蛋白延展性以及创伤引起的黑化反应能力进行探究,与对照相比未出现明显变化。此外通过制备Rgn蛋白的多克隆抗体将从蛋白水平对Rgn蛋白进行检测,能够更加直接、准确的揭示其细胞定位及表达情况,为研究果蝇Rgn蛋白的生物学功能提供研究基础。
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