茶树核糖体失活蛋白的抗虫功能分析

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在世界范围内,虫害造成的农作物经济损失每年大约数千亿美元。化学药剂是防治虫害的主要手段之一,这种方法虽然效果明显易操作,但药剂残留所造成的环境污染等问题也日益严重。随着基因工程技术和分子生物学的快速发展,利用这些科学技术选育出抗虫或耐虫的品质优、产量高的新型农作物品种具有十分重要的意义。本实验室前期利用3’RACE和5’RACE克隆这个基因的基因序列,从抗假眼小绿叶蝉的茶树品种“凫早2号”中分离出一个CsRIP基因的cDNA序列,命名为:CsRIP I。CsRIP I是一类使核糖体失活进而抑制蛋白质合成的毒蛋白。核糖体失活蛋白(Ribosome inactivating protein, RIPs)是能够抗病毒、真菌和昆虫细胞的蛋白质。这种蛋白在植物中广泛存在,其特有的细胞毒性为我们利用相关的RIP基因进行作物抗虫育种提供了一条可能的途径。烟草是我国重要的经济植物之一,但烟草的虫害种类繁多且难以防治。本研究构建了pBI121-CsRIPI转化载体,通过农杆菌介导的叶盘法转化烟草,通过预培养、侵染、共培养、选择培养、生根培养,成功把茶树核糖体失活蛋白基因CsRIPI(?)专入烟草中。通过筛选,培育出转基因烟草植株,并保存了T0代自交的烟草种子。对获得的转基因植株进行PCR检测,初步表明,目的基因已经成功插入到烟草基因组中。采用室内离体叶片接种法,对转基因烟草TO代植株进行蚜虫和小地老虎的抗性鉴定。鉴定结果初步表明:转基因烟草上生长的烟草桃蚜的存活率和平均产雌率都低于对照组蚜虫,说明转基因烟草对蚜虫生殖力有较明显影响;取食转基因烟草对小地老虎初孵幼虫死亡率有一定的影响,对1龄和2龄幼虫的抗性较低,对3龄以上幼虫基本没有抗性。
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