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猪链球菌（Streptococcus，S.suis）是一种重要的人畜共患病病原，猪感染链球菌病的症状表现不一，高致病性菌株感染猪会导致猪的脑膜炎、关节炎、心内膜炎、肺炎、败血症、流产和突然死亡等疾病。根据荚膜多糖抗原将猪链球菌分为35个血清型，其中猪链球菌2型(SS2)致病性强、流行广，是最主要的致病原。猪链球菌2型含有多种毒力因子，如荚膜多糖(CPS)、溶菌酶释放蛋白（MRP）、胞外因子(EF)、猪溶血素(SLY)和IgG结合蛋白等。其中猪链球菌溶血素属于巯基激活类细胞毒素家族，能与宿主细胞受体结合而导致细胞通透性增加并裂解，证实溶血素具有细胞毒性，并能阻断补体介导的杀伤和吞噬作用。因此有学者认为溶血素可能是亚洲和欧洲猪链球菌2型最重要的毒力相关因子。本试验的目的:构建溶血素基因的重组酵母表达质粒，进行甲醇诱导得到溶血素蛋白，分析表达产物的免疫反应性，为猪链球菌2型疫苗研究做基础，并进一步免疫SPF兔得到抗血清，可用于制作单特异性抗血清国家标准物质，也可应用于疫苗的评定。本研究通过分子克隆和酵母表达等方法获得以下结果:
1、对猪链球菌SS2/C55606株溶血素基因序列和表达载体pPICZαA进行序列分析并设计引物，扩增出溶血素基因，并通过酶切、连接到表达载体pPICZαA上，转化到大肠杆菌Top10感受态细胞中，筛选阳性克隆，得到重组质粒pPICZαA-SS2/C55604-SLY。
2、将重组载体进行SacⅠ酶切后，得到线性化质粒，用试剂盒进行化学转化到毕赤酵母感受态细胞中，通过对阳性菌株的筛选和酵母基因的PCR鉴定，得到DNA重组毕赤酵母菌株。
3、使用DNA重组毕赤酵母菌株进行溶血素基因诱导，优化条件为:温度28.5℃，甲醇浓度第1d1％、之后每天2％。在第5d(108h)收获上清，并超滤至原体积的1/10～1/5，得到浓缩蛋白。对蛋白进行SDS-PAGE电泳、溶血试验和间接ELISA鉴定，确定其为溶血素蛋白，且活性很高，进一步纯化可用于疫苗的研究。
4、对得到的蛋白简单测定其浓度后，与弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂混匀乳化，分四次免疫9只SPF新西兰大白兔，心脏采血离心后得到450ml抗血清，进行间接ELISA和琼扩试验鉴定抗血清的效价，其ELISA效价均达到1∶16000以上，可用于制作单特异性抗血清国家标准物质，以及应用于疫苗的评价。