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近年来,罗非鱼逐渐成为国内养殖规模最大的淡水鱼之一,但不同品系或不同家系间罗非鱼的生长速度存在较大差异,从而影响罗非鱼的养殖时间、产量及出产规格,增加了养殖成本,降低了罗非鱼产业的经济效益。因此,通过分子辅育技术加强罗非鱼优良性状个体的选育对罗非鱼的行业发展存在重要意义。本研究以2个品系的罗非鱼为研究对象,探究了主要摄食相关基因ghrelin、NPY、prepro-orexin和主要生长相关基因GHR1、GHR2、IGF-I5’侧翼区和编码区的多态性与罗非鱼生长的关联性,筛选了与生长性状相关的SNPs位点,并对SNPs位点对鱼类生长的调控方式进行了初步分析。研究具体包含以下三个方面:1.罗非鱼摄食调控基因SNPs的筛选及其与生长的关联分析。实验通过吉富罗非鱼(简称JF群体,下同)和埃及尼罗罗非鱼(简称AJ群体,下同)的亲代个体进行SNPs初步筛选,并以SNPs是否引起序列功能的改变为条件,进行了 SNPs的二次筛选,并对筛选出的SNPs位点与子代个体的生长性状进行关联性分析。结果表明:(1)经过初步筛选,在JF群体3个摄食相关基因中共发现了 12个SNPs位点,在AJ群体中共发现了 8个SNPs位点。(2)经过二次筛选,在JF群体3个摄食相关基因中共保留了 7个位点,其中ghrelin基因中仅保留S1位点,NPY基因中仅保留S4位点,prepro-orexin基因中共保留5个SNPs位点,分别为S7、S8、S9、S10和S11。在AJ群体中共保留了 5个位点,其中ghrelin基因中仅保留S’1位点,NPY基因中仅保留S’2位点,prepro-orexin基因中共保留3个SNPs位点,分别为S’5、S’6和S’7。(3)在JF群体中,S7、S8和S9位点均表现为纯和基因型CC在各性状上均显著大于杂合基因型CG(P<0.05);S10位点则表现为杂合基因型CT在各性状上均显著大于纯和基因型CC(P<0.05);仅有S1位点在3个不同基因型上各性状均产生显著差异,表现为TT>CT>CC(P<0.05)。在AJ群体中未发现与生长性状存在关联的SNPs位点。(4)经过对prepro-orexin基因中的SNPs位点进行连锁双倍型分析,JF群体中的5个SNPs位点共组成9种双倍型,其中D7双倍型在各项生长指标上显著高于D2、D4、D5、D9(P<0.05)。AJ群体中的3个SNPs位点共组成6种双倍型,但未发现与生长性状存在关联的双倍型。2.罗非鱼生长调控基因SNPs的筛选及其与生长的关联分析。实验通过JF群体AJ群体的亲代个体进行SNPs初步筛选,并以SNPs是否引起序列功能的改变为条件,进行了 SNPs的二次筛选,并对筛选出的SNPs位点与子代个体的生长性状进行关联性分析。结果表明:(1)经过初步筛选,在JF群体3个生长相关基因中共发现了 19个SNPs位点,在AJ群体中共发现了 13个SNPs位点。(2)经过二次筛选,在JF群体3个生长相关基因中共保留了 9个位点,其中GHR1基因中保留7位点,分别为N3、N4、N7、N8、N9、N11和N13;GHR2基因中保留2个位点,分别为N17和N19;IGF-I基因中没有SNPs位点被保留。在AJ群体中共保留了 5个位点,其中GHR1基因中保留4位点,分别为N’2、N’4、N’5和N’7;GHR2基因中仅保留N’10位点;IGF-I基因中没有SNPs位点被保留。(3)在JF群体中,N3、N4、N7、N8、N9位点在除体长外的所有性状中,均表现为突变后纯和基因型个体显著大于突变前纯和基因型个体(P<0.05);N17位点在各性状上表现为突变前纯和基因型个体显著大于杂合基因型个体(P<0.05)。在AJ群体中,仅N’10位点在体长、头长上表现为杂合基因型个体显著大于突变前纯和基因型个体(P<0.05)。(4)经过对GHR1、GHR2基因中的SNPs位点进行连锁双倍型分析,JF群体GHR1基因中的7个SNPs位点共组成7种双倍型,其中E1与E2在体重、全长、体长等5个性状上显著大于E7(P<0.05);GHR2基因中的2个SNPs位点共组成6种双倍型,其中E12与E13间在各性状上显著大于E9(除体重外,P>0.05)、E10和E11(P<0.05)。AJ群体GHR1基因中的4个SNPs位点共组成7种双倍型,但未发现与生长性状存在关联的双倍型。3.基于ghrelin基因S1(C-226T)位点的SNPs位点对鱼类生长的调控过程的探究。实验通过对ghrelin基因5’侧翼区进行具体的功能预测,并针对C-226T位点的3个基因型CC、CT、TT进行不同基因型个体ghrelin基因的实时荧光定量分析。结合突变对序列功能的影响,从实际功能角度对C-226T位点进行分析。结果表明:(1)ghrelin基因5’侧翼区包含多种重要的启动子元件,包括核心启动元件(Initiator element,Inr)、TATA 框(TATABox)、CAAT 框(CAATBox)、GAGA 序列、CAC 序列和特异性蛋白1(Specificity protein 1,Sp1);ghrelin基因的5’侧翼区可能含有激活蛋白2(Activator protein-2,AP2)、肌源性分化(Myogenic differentiation,MyoD)、八聚体转录因子 1(Octamer transcription factor 1,Oct-1)、激活转录因子 1(Activating transcription factor 1,ATF1)、锌指蛋白 217(Zinc finger protein 217,ZNF 217)和血清反应因子(Serumresponse factor,SRF)等转录因子的结合位点。此外,C-226T的TT基因型突变会导致ghrelin基因5’侧翼区增加1个具有促进基因转录功能的Oct-1转录因子结合位点。(2)禁食12 h后,C-226T位点TT基因型个体的ghrelin基因相对表达量是CC基因型1.65倍,两组间产生显著差异(P<0.05)。TT基因型个体相对表达量是CT基因型个体的1.22倍(P>0.05),同时,CT基因型个体相对表达量是CC基因型个体的1.35倍(P>0.05)。(3)基于上述结果,做出如下推论:当ghrelin基因C-226T位点表现为TT基因型时,相比CC基因型启动子区增加了 Oct-1的转录因子结合位点,提高了 Oct-1的结合效率,使ghrelin启动子活性大大增强并增加了ghrelin的表达,从而刺激了鱼类进食的频率并导致体重等各生长性状的显著升高。因此,ghrelin基因中C-226T的TT基因型具有极大的分子标记发展潜力,可用于具有优良生长性状的罗非鱼个体的分子辅育工作。