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猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪圆环病毒病(PCVD)和猪瘟(CSF)是危害养猪业发展的一类重要的传染病,这三种疾病每年均给养猪业造成巨大的经济损失。这三种病均能引起猪繁殖障碍和呼吸系统疾病,由于这三种疾病的临床表现非常相似,临床诊断容易引起混淆,因此早期的鉴别诊断对控制这三种疾病的流行显得尤其重要。目前针对这三种病的病原体的常规诊断方法有病原分离鉴定和血清学等方法。病原分离鉴定繁琐、耗时、检出率低;血清学方法虽然简便快速,但存在非特异性反应,并且不能完全区别免疫接种与自然感染阳性等缺点。有学者建立了检测PRRSV、PCV2和CSFV的PCR技术,但同时检测这三种病毒的多重PCR方法还未见报道。本试验建立了一种快速、敏感、特异的检测PRRSV、PCV2和CSFV多重PCR方法,并使用该方法对临床病料进行了检测。1检测PRRSV、PCV2和CSFV多重PCR的建立参照GeneBank收录的猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型标准株(ATCCVR-2332)的ORF7保守序列、猪圆环病毒2型(AF381175)的ORF2基因保守序列和猪瘟病毒的E2基因保守序列,设计合成了三对特异性引物。通过优化镁离子浓度、引物浓度和退火温度等条件,建立了检测PRRSV、PCV2和CSFV的多重PCR方法。该方法特异性强,灵敏度高,能检出三种病毒的最低含量分别为4.8pg、5.0pg和14.5pg。2 PRRSV、PCV2和CSFV多重PCR方法的临床应用利用建立的PRRSV、PCV2和CSFV多重PCR方法对安徽省合肥、安庆、六安、蚌埠、滁州、巢湖、淮北、宿州、阜阳和池州10个地区的120份临床疑似病料进行检测,除阜阳地区未分离到PRRSVV和CSFV外,PRRSV、PCV2和CSFV总阳性检出率分别为58.33%、49.17%和23.33%。经生物统计分析,PRRSV和PCV2的感染在安徽省猪群中最为严重,且有上升的趋势。此外,PRRSV的感染还存在明显的地区差异,其中安庆、六安和滁州地区感染严重。对病料进行PRRSV、PCV2和CSFV混合感染的检测,检测结果是PRRSV与PCV2、PRRSV与CSFV、PCV2与CSFV以及PRRSV、PCV2、CSFV三者混合感染的阳性检出率分别为32.50%、17.50%、9.17%、6.67%。经生物统计分析,在安徽省发病猪群中存在着PRRSV、PCV2和CSFV的混合感染,其中以PRRSV与PCV2的混合感染率最高。3高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Nsp2 1594～1680)RT-PCR检测试剂盒和PRRSV美洲型标准株(ATCCVR-2332)PCR方法的比较应用高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒((Nsp2 1594～1680)RT-PCR检测试剂盒(方法1)和PRRSV美洲型标准株(ATCCVR-2332)PCR方法(方法2)对安徽省合肥、安庆、六安、滁州、巢湖、淮北、宿州和池州8个地区的65份病料进行同步检测,方法1对病料的阳性检出率为73.84%,方法2对病料的阳性检出率为75.38%,两种检测方法的符合率达86.15%。生物统计结果表明,当前安徽省猪群中PRRSV的感染以变异株为主。以上研究表明,本试验建立的这种快速、敏感、特异的检测PRRSV、PCV2和CSFV多重PCR方法具有重要的临床意义。