大豆(Glycine max(L)Merr)作为我国一种重要的油料作物,被应用于社会生活的各个领域,但由于我国大豆的生产受到地下害虫的危害,导致大豆大面积的减产,其中,鞘翅目类地下害虫蛴螬对我国大豆的生产影响尤为严重。大豆生长期间,鞘翅目地下害虫蛴螬哺食大豆根系,影响大豆正常生长,每年因鞘翅目地下害虫蛴螬的危害造成大豆减产10.0%~20.0%,严重的情况下能减产30.0%以上。利用基因工程技术将抗虫基因转入大豆,能够显著提高大豆对地下害虫蛴螬的抗性。本试验根据Seamless Assembly Cloning无缝克隆技术的原理,以pCAMBIA3301为骨架,将抗虫基因Cry8-like以及大豆根系特异性启动子片段RSP重组到该基础载体上,构建了含有筛选标记Bar的植物根系特异性表达载体pCAMBIA3301-RSP-Cry8-like-nos。通过农杆菌介导法将构建好的重组植物根系特异性载体分别转入大豆受体品种‘吉农28’和‘吉农42’中。通过PCR进行了初步检测,将收获的阳性植株种子于人工气候室进行加代,并分别对T2代转基因植株进行了Southern blotting整合度检测,荧光定量PCR转录水平检测以及室内抗虫初步鉴定。得到的主要试验结果如下:1.利用无缝克隆技术,将抗虫基因Cry8-like和大豆根系特异性启动子片段RSP重组到pCAMBIA3301载体上,成功构建了含有抗草铵膦筛选标记的植物根系特异性表达载体pCAMBIA3301-RSP-Cry8-like-nos。2.使用农杆菌介导法将构建的植物根系特异性表达载体转入两个大豆受体品种‘吉农28’和‘吉农42’中。转化植株经PCR检测,农杆菌介导法得到T0代‘吉农28’阳性植株5株,转化率为2.33%;T0代‘吉农42’阳性植株2株,转化率1.74%。3.将收获的T0代阳性植株的种子于人工气候室加代,经过PCR初步检测分别得到T1代‘吉农28’阳性植株17株,T1代‘吉农42’阳性植株13株;将部分T1代阳性植株的种子于人工气候室加代,经过PCR初步检测分别得到T2代‘吉农28’阳性植株36株,T2代‘吉农42’阳性植株25株。4.T2代转基因植株Southern blotting结果显示,抗虫基因Cry8-like以单拷贝的形式整合到大豆基因组中,且杂交信号强度不同。5.对Southern杂交出现单拷贝杂交信号的转基因植株进行荧光定量PCR,结果显示,抗虫基因Cry8-like在转基因植株幼根得到表达,转基因植株相对表达量与非转化受体对照相比最高提高了13.83倍,最低提高了1.33倍。6.室内抗暗黑鳃金龟幼虫鉴定结果表明,杀虫率最高达到20.00%,抑制率最高达到56.39%,本试验的抗虫效果与目标基因的表达强度达到显著正相关,转基因植株提高了抗暗黑鳃金龟幼虫的能力。