花榈木叶提取物抗抑郁作用及化学成分分离与富集

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花榈木(Ormosia henryi Prain)为豆科红豆属常绿乔木,民间调研发现其叶是一种具有潜在抗抑郁活性的新生物资源,但缺乏现代科学研究,对其化学成分也未有研究报道。本课题以花榈木叶提取物为原料,采用小鼠模型研究其抗抑郁作用,并通过小鼠急性毒性试验初步确定其安全性;然后采用现代分离纯化技术从提取物中分离并鉴定了8个黄酮类化合物,在此基础上进一步采用超高效液相色谱-电喷雾四级杆飞行时间质谱法(UPLC-ESI-QTOF-MS/MS)技术对提取物中其他化学成分进行分析,共鉴定或初步推测出46种黄酮类化合物;最后对花榈木叶总黄酮提取工艺及纯化工艺进行优化,旨在为花榈木叶开发利用提供参考。主要研究结果如下:(1)采用慢性不可预知温和应激(CUMS)小鼠模型,对花榈木叶提取物进行抗抑郁作用研究。结果显示花榈木叶提取物高剂量(150 mg/Kg)能明显提高小鼠糖水偏爱指数,缩短小鼠摄食潜伏期;花榈木叶提取物中、高剂量(100 mg/Kg、150 mg/Kg)能显著增加小鼠在悬尾测试中的活动时间,减少休息时间,并能显著提高小鼠海马组织中脑源性神经营养因子(BDNF)含量,结果表明花榈木叶提取物具有明显的抗抑郁作用。(2)花榈木叶提取物急性毒性试验表明,小鼠经口灌服花榈木叶提取物0~4小时内,小鼠自主活动未见明显异常。给药后观察14天,与对照组比较体重无明显差异,各器官表面和切面均未见明显异常情况,无死亡。未见明显毒性反应剂量为10 g/kg(250mg/mL)。(3)采用高速逆流色谱和制备型高效液相色谱联用技术对上述花榈木叶提取物进行制备分离,得到8个化合物,经质谱、核磁技术鉴定其结构,分别为2′′-O-鼠李糖基异荭草素、异荭草素、荭草素、2′′-O-鼠李糖基牡荆素、2′′-O-鼠李糖基异牡荆素、异牡荆素、香叶木苷、蒙花苷,均为该植物的首次报道。(4)采用UPLC-ESI-QTOF-MS/MS技术并结合分离化合物质谱裂解规律的解析,对花榈木叶提取物中多个化学成分进行进一步分析,初步鉴定了46种黄酮类化合物,其中9个碳苷黄酮,11个黄酮苷元,8个氧苷黄酮,5个异黄酮,5个氧苷异黄酮,8个异戊烯基黄酮和多甲氧基黄酮。(5)采用回流提取法对花榈木叶总黄酮提取工艺进行优化,在单因素试验的基础上,利用正交试验最终确定花榈木叶总黄酮的最佳提取工艺参数为:乙醇体积分数60%,料液比1∶40(g/mL),提取温度80℃,提取时间1.5 h。在此工艺下花榈木叶总黄酮的得率为2.83%,提取物干粉中总黄酮含量为15.95%。(6)采用大孔吸附树脂法对花榈木叶中总黄酮富集进行工艺优化,通过十种大孔吸附树脂(HPD-100、HPD-300、HPD-400、HPD-600、HPD-826、DM130、AB-8、D101、NKA-9、X-5)静态吸附和解吸能力的考察,筛选出AB-8大孔吸附树脂进行工艺优化,并确定其最佳纯化工艺参数为:上样液中黄酮浓度1.71 mg/mL,上样液pH值3,上样流速4 BV/h,上样体积5 BV,洗脱剂乙醇体积分数80%,洗脱流速3 BV/h,洗脱体积4 BV。在该工艺条件下,纯化干燥产品中总黄酮含量为29.51%。
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