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目的:观察A549细胞及A549/DDP细胞hMLH1基因的表达及其甲基化状态的关系,并用去甲基化试剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)干预体外培养的非小细胞肺癌耐药细胞A549/DDP,观察是否能通过去甲基化作用恢复hMLH1基因表达从而逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药。方法:1.选用肺腺癌耐药细胞株A549/DDP作为研究对象,以肺腺癌细胞株A549作为对照,RT-PCR测试A549细胞及A549/DDP细胞的hMLH1基因表达情况,及5-Aza-CdR干预A549/DDP细胞后hMLH1基因表达情况。2.甲基化特异性PCR检测A549细胞及A549/DDP细胞的hMLH1基因甲基化状态,及5-Aza-CdR干预A549/DDP细胞后hMLH1基因甲基化状态。3.MTT试验观察不同浓度的顺铂对A549/DDP细胞5-Aza-CdR干预前后细胞抑制率的影响。4.Hoechst33258染色观察5-Aza-CdR干预前后顺铂对A549/DDP细胞凋亡细胞凋亡的形态学变化。5.流式细胞仪(FCM)检测5-Aza-CdR干预前后不同浓度的顺铂对A549/DDP细胞凋亡指数、凋亡的水平。结果:1.hMLH1 mRNA在A549细胞中的表达较在A549/DDP细胞中高,平均OD比值分别为0.7766±0.0405,0.2059±0.0093(P＜0.05),经5-Aza-CdR干预A549/DDP细胞后hMLH1 mRNA表达增高,在0-10μmol/L范围内呈浓度依赖性,10μmol/L与20μmol/L 5-Aza-CdR作用时其OD比值分别为0.7989±0.0427,0.7802±0.0411,比较无显著差异(P＞0.05)。2.A549细胞hMLH1基因为非甲基化状态,而耐药株A549/DDP细胞为部分甲基化状态,A549/DDP细胞经5-Aza-CdR脱甲基作用后hMLH1基因呈非甲基化状态。3.MTT实验检测细胞增殖,分为A549组、A549/DDP组、经10μmol/L 5-Aza-CdR干预后的A549/DDP组,三组经不同浓度顺铂48小时作用后的IC50值分别为4.719±0.712μmol/L,30.069±1.813μmol/L,6.921±0.620μmol/L。10μmol/L 5-Aza-CdR可增强A549/DDP细胞对顺铂的化疗敏感性,但仍不及其亲本细胞株A549细胞对顺铂的敏感性,其差异有统计学意义(P＜0.05)。4.5-Aza-CdR干预后的A549/DDP细胞经顺铂作用后,比单用顺铂抑制A549/DDP细胞的凋亡形态学改变明显,凋亡小体以及核固缩现象增多。5.流式细胞仪检测细胞凋亡水平,分为A549/DDP组、经10μmol/L5-Aza-CdR干预后的A549/DDP组,两者自发凋亡率分别为(1.41±0.10)%,(1.67±0.18)%,比较无显著性差异(P＞0.05)。经顺铂作用后后者凋亡率较前者增高,有显著性差异(P＜0.05)。结论:1.hMLH1基因甲基化可能参与了非小细胞肺癌耐药细胞株A549/DDP的顺铂耐药;2.去甲基化药物5-氮杂-2’-脱氧胞苷能抑制hMLH1基因甲基化,恢复hMLH1基因表达,并能增强顺铂对A549/DDP细胞的细胞增殖抑制和凋亡。