剪切力及抑制物对木葡糖醋杆菌和纤维素合成的影响及耐受菌株选育

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细菌纤维素具有独特的结构和物理化学性能,是世界公认的性能优异的新型生物纳米材料,在食品、医药、造纸、纺织等领域具有广阔的应用前景。针对细菌纤维素动态培养时纤维素产量低和以木质纤维素酸水解液为碳源发酵制备细菌纤维素时存在抑制物的问题,本研究主要考察了动态培养和麦秆酸水解液中抑制物对木葡糖醋杆菌和细菌纤维素合成的影响,并结合诱变以选育抑制物耐受菌株。以摇瓶培养和机械搅拌发酵罐培养两种体系为对象,考察了动态培养时剪切力对木葡糖醋杆菌和细菌纤维素合成的影响。剪切力的存在降低了纤维素的产量,在添加玻璃珠的三角瓶中经9轮震荡培养后,细菌纤维素的产量为原始菌株的25%;机械搅拌发酵罐培养时,用剪切力大的六叶平桨进行发酵时,细菌纤维素的产量最低,用剪切力小的框式桨进行发酵时,细菌纤维素的产量较高;剪切力对可溶性纤维素的产量影响不大。在剪切力存在下木葡糖醋杆菌菌体变小,菌落形态改变,菌落由原来的突起、白色不透明、表面略粗糙变为扁平、透明、光滑、湿润、略带粉色;单位体积发酵液菌数降低;对数期延后,生长周期延长。在有剪切力的体系中筛选耐受剪切力的菌株,所得菌株产细菌纤维素能力仍较低。以麦秆酸水解液为碳源配制培养基,考察酸水解液抑制物对木葡糖醋杆菌和细菌纤维素合成的影响。酸水解液影响木葡糖醋杆菌的形态、生长及纤维素的产量和形态结构。细菌纤维素的产量随酸水解液浓度增加而降低,以100%麦秆酸水解液配制培养基时,纤维素产量为0.07g/L,仅是葡萄糖为碳源的22%。酸水解液为碳源产生的细菌纤维素直径变大,由原来的平均25nm变为35-100nm,形成的纤维网不均匀,呈现团状或簇状。菌体生长对数期延后,生长周期延长,菌体直径变大;菌落呈现两种形态,一种菌落较小,呈白色颗粒状、光滑、湿润,可合成纤维素,另一种生黏液状平铺在平板上,较少合成细菌纤维素;单位体积培养液中菌数降低。通过亚硝酸诱变、紫外诱变、亚硝酸结合紫外诱变三三种方法选育抑制物耐受菌株。亚硝酸诱变筛选得到1株抑制物耐受菌株,其细菌纤维素产量比原始菌株增产120%,而紫外诱变筛选得到的菌株细菌纤维素增产15%左右。以亚硝酸诱变选育的菌株为出发菌株,再通过亚硝酸和紫外诱变,筛选得到二株抑制物耐受菌株,细菌纤维素产量比诱变前的原始菌株增产150%。论文结果为今后充分利用木质纤维素酸水解液制备细菌纤维索、提高细菌纤维素产量和降低纤维索生产成本奠定了基础。
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