【摘 要】
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海藻糖分子是由两个葡糖基以a-1,1糖苷键连接而成,具有优良的生物学性能和食品加工性能,其被广泛应用于食品工业等领域。本实验中,我们对耐压耐冷沉积微杆菌Microbacterium s
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海藻糖分子是由两个葡糖基以a-1,1糖苷键连接而成,具有优良的生物学性能和食品加工性能,其被广泛应用于食品工业等领域。本实验中,我们对耐压耐冷沉积微杆菌Microbacterium sediminis YLB-01的重组6-磷酸海藻糖合成酶(msTPS)和6-磷酸海藻糖磷酸酯酶(msTPP)的性质进行了一系列的研究。msTPS和msTPP预测分子量分别为55.15kDa和28.59kDa,理论等电点分别为5.89和4.59。我们首先以Microbacterium sediminis YLB-01的TPS和TPP编码基因为依据,分别克隆目的基因,构建重组质粒并将其导入到表达宿主菌体内进行诱导表达,然后通过Ni2+亲和层析、透析及超滤获得较纯浓缩蛋白收集液,最后通过相关实验对其酶学性质做了探究。研究表明:(1)重组-nsTPS最适反应温度和pH分别为40℃和7.5,4℃时依然具有较高的活性,热稳定性较差,Mg2+Co2+或Ba2+能极大的促进其活性,Mn2+、Zn2+、Ca2+和Hg2+对活性没有影响,在本实验条件下对6-磷酸葡萄糖和尿苷二磷酸葡萄糖的Km值分别为1.38mM和1.53mM,最大反应速度Vmax为62.5 U/min·mg。(2)重组msTPP酶最适反应温度和pH分别为30℃和7.5,热稳定性也较差,Mg2+存在的条件下活性达到最高,Co2+或Ba2+对活性有较大的促进作用,Mn2+、Zn2+、Ca2+对重组酶活性没有影响,在本实验条件下对6-磷酸海藻糖的Km为2.45mM,最大反应速度Vmax=82.64U/min·mg。该研究一方面丰富了深海微生物海藻糖生物合成酶在酶学性质方面的信息,为海藻糖生物工程相关产业提供新的候选基因;另一方面也为利用酶合成法生产海藻糖提供理论指导。
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