目的:动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）为基础病变的心血管疾病是人类健康的头号杀手,缓解AS对控制心血管疾病的发展至关重要。安宫牛黄丸（Angong Niuhuang Pill,ANP）是传承百年的急救圣药,具有清热解毒、镇惊开窍的作用,临床上主要应用于脑卒中、高热惊厥、脑膜炎、脑出血等危重疾病的治疗,但在造成这些危重疾病的基础性病变AS中鲜有研究。本课题采用载脂蛋白E敲除（Apolipoprotein E,ApoE）小鼠给予高脂饮食复制AS模型,观察ANP对早中期AS的影响并阐明其可能的作用机制。方法与结果:首先,实验研究并观察了ANP对ApoE^-/-小鼠早期AS模型的影响。SPF级C57BL/6J雄性小鼠12只,随机分为C57空白对照组、C57+ANP组（0.50 g/kg,每组6只）;SPF级ApoE^-/-雄性小鼠39只,随机分为ApoE^-/-阴性对照组(ApoE^-/-+普通饮食,6只)、模型组(ApoE^-/-+高脂饮食,6只)、辛伐他汀组（3.5 mg/kg,6只）、ANP低、中、高剂量组（0.25 g/kg,0.50 g/kg,1.0 g/kg,每组7只）。模型复制方法:高脂饲料连续喂养8周。给药方法:C57空白对照组、ApoE^-/-阴性对照组和模型组分别灌胃等体积的生理盐水,给药体积均为0.1m L/10g,隔天1次,连续给药8周,给药与造模同时进行。第8周给药结束后,通过血糖、血脂检测以及病理组织检查确认AS模型的建立;通过脏器系数或指数的计算评价ANP在给药期间对小鼠肝、肾的影响;通过流式分析Treg细胞、Th17细胞,实时荧光定量PCR技术测定主动脉炎症因子及趋化因子的表达量,免疫组化检测主动脉根部蛋白表达,评价ANP对ApoE^-/-小鼠早期AS模型的影响。结果显示:与C57空白对照组比较,ApoE^-/-阴性对照组血清CHOL、TG、HDL、LDL变化具有显著性差异,主动脉根部和主动脉有少量脂质斑块沉积;而C57+ANP组的各项指标无明显差异,主动脉根部和主动脉无明显脂质斑块沉积;模型组的血脂显著升高（p<0.05或0.01）,主动脉根部和主动脉油红O染色明显,血管壁脂质斑块大量沉积。与ApoE^-/-阴性对照组比较,模型组的血脂显著升高（p<0.05或0.01）。与模型组比较,ANP给药组的肝脏系数、肾脏系数无显著性差异,ANP对血脂和血糖无明显调节作用,但显著升高Treg细胞比例,显著降低Th17细胞比例（p<0.05或0.01）,显著下调脾脏IL-6基因表达,上调TGF-β1基因表达（p<0.05或0.01）,显著下调主动脉IL-17A、IL-6、MCP-1、MCP-2,MCP-3、及CCR2,CXCR3基因表达,上调IL-10和TGF-β1表达（p<0.05或0.01）,显著降低主动脉根部ICAM-1和VCAM-1蛋白表达（p<0.01）;辛伐他汀组的血脂显著降低,Treg细胞比例显著升高,Th17细胞比例显著降低,各炎症因子均有不同程度的下调,主动脉根部ICAM-1和VCAM-1表达也显著降低（p<0.05或0.01）。以上实验初步证实ANP抗ApoE^-/-小鼠早期动脉粥样硬化,下一步实验将深入研究ANP抗ApoE^-/-小鼠AS的作用机制。12只SPF级C57BL/6J雄性小鼠为C57空白对照组;SPF级ApoE^-/-雄性小鼠60只,随机分为模型组(ApoE^-/-+高脂饮食)、辛伐他汀组（3.0 mg/kg）、ANP低、中、高剂量组（0.25 g/kg,0.50 g/kg,1.0 g/kg）,每组12只。模型复制方法:高脂饲料连续喂养10周。给药方法:C57空白对照组和模型组分别给予等体积的生理盐水,给药体积均为0.1 m L/10g,隔天1次,连续给药10周,给药与造模同时进行。第10周给药后通过血清生化指标检测、流式分析脾脏Th17/Treg比例、实时荧光定量PCR及蛋白印迹法检测脾脏和主动脉炎症基因和蛋白的表达,以及免疫荧光法检测主动脉根部炎性细胞浸润,阐明ANP抗ApoE^-/-小鼠AS的作用机制。结果显示:与C57空白对照组比较,模型组血脂显著升高,Th17/Treg比例显著降低,炎症因子显著下调（p<0.05或0.01）。与模型组比较,ANP给药组升高胸腺和脾脏指数,辛伐他汀组血脂显著降低,ANP高剂量组LDL-C/HDL-C比值显著降低（p<0.05）,ANP给药组和辛伐他汀组Treg/CD4⁺T比例显著升高,Th17/CD4⁺T比例、Th17/Treg比例显著降低（p<0.05或0.01）。ANP给药组脾脏RORγt基因和蛋白表达量均显著下调,Foxp3基因和蛋白表达量显著上调,主动脉IFN-γ、TNF-a、IL-1β、CCL2、CCR2、CCL5、CCR5、MMP-2、MMP-9基因和蛋白表达均显著下调（p<0.05或0.01）,血清IL-10含量显著升高,IL-6含量显著降低（p<0.05或0.01）。主动脉根部Masson染色显示,C57空白对照组未见异常病理改变,模型组血管内壁出现大量纤维斑块,ANP给药组和辛伐他汀组纤维斑块和胶原纤维明显减少,病理状况明显改善。主动脉根部免疫荧光染色显示,C57空白对照组未见炎性细胞浸润,模型组巨噬细胞、树突状细胞以及血管平滑肌细胞大量聚集于血管内壁,沉积明显,ANP给药组和辛伐他汀组巨噬细胞、树突状细胞以及血管平滑肌细胞浸润均有不同程度的改善,半定量分析巨噬细胞、树突状细胞以及血管平滑肌细胞含量显著降低（p<0.01或0.001）。结论:1.ApoE^-/-小鼠能够自发产生AS,但过程较为漫长,高脂饮食可加快ApoE^-/-小鼠AS进程,ApoE^-/-小鼠高脂饮食8周或10周成功建立了早期、中期AS模型。2.ANP通过调控RORgt、Foxp3、IL-6、TGF-β1的表达调节Th17/Treg免疫平衡;通过抑制促炎症介质IL-6、IL-1β、TNF-a、IFN-g、ICAM-1、VCAM-1的表达,同时促进抑炎症介质IL-10、TGF-β1的表达,下调趋化因子CCL2、CCL5及受体CCR2、CCR5的表达从而发挥抗慢性炎症作用;主要通过下调MMP-2、MMP-9的表达,改善炎性细胞在斑块的浸润,发挥维持斑块稳定作用。3.ANP通过调节Th17/Treg平衡、抑制慢性炎症以及维持动脉斑块稳定三个方面保护早中期AS ApoE^-/-小鼠,发挥ANP多通路多靶点抗AS效应。此外,ANP小剂量给药侧重发挥抗炎症作用,ANP高剂量给药侧重发挥免疫调节作用。