蚓激酶(Lumbrokinas)是一种常见的用于治疗心脑血管疾病的药物。它是从传统中药材-蚯蚓发现的具有良好的活血、降血脂、降血粘的抗血栓活性物质。它与血栓有特殊的亲和力,能够跟踪溶栓,有效地溶解微栓,修复血管内皮受损细胞。蚓激酶具有副作用小、安全性高、疗效较显著的优势,它具有很广阔的市场前景。目前国内对蚓激酶的提取分离工艺的研究很多,他们[1-3]纯化过程中采用了硫酸铵沉淀法,耗费时间长,分离纯化步骤复杂,不适宜工业化生产。如何有效地从蚯蚓中提取纤溶酶-蚓激酶,以便应用于血栓病的治疗和预防,是一项具有重大应用意义的研究。本研究粗提取利用蚓激酶热稳定性的特点,采用适宜温度去除部分杂蛋白的方法为后期纯化提供便利；分离纯化仅采用两步色谱分离就获得了纯度达95%以上的蚓激酶,这些大大简化了纯化步骤,提高了蚓激酶的纯度。本文将蚯蚓匀浆液经过两次离心、300K中空纤维柱超滤除杂,5K中空纤维柱超滤浓缩得到杂蛋白更少的粗提取液,为后期进一步纯化奠定基础。利用蚓激酶热稳定的性质,通过优化得到最佳的热处理条件,在二次离心前加入热处理的步骤进行除杂,去除了不耐热的蛋白杂质。加入的300K中空纤维柱和5K中空纤维柱对粗提取液进一步除杂和浓缩,减少了粗提取液的杂蛋白,减小了粗体液的体积,减化了后期工艺步骤。经一系列条件的优化后,确定了以溴化氰活化的Sepharose4B亲和胶从粗提液来捕获蚓激酶；用10K超滤柱去除蛋白中的氨水并浓缩,用DEAE阴离子离子交换层析对蛋白进行最后的精纯,得到了纯度95%以上的蚓激酶。通过纯化后获得的蚓激酶比活为210000U/mg,经SDS-PAGE分析得一条带,相对分子量为28000；高效液相色谱分析其纯度达95%以上。