【摘 要】
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氧化应激是导致动物肝细胞结构和功能破坏以及机体组织损伤和器官病变的主要病理机制之一。寻找和开发高效的抗氧化制剂对于防治氧化应激引发的肝损伤类疾病具有重要意义。葡萄籽原花青素具有强抗氧化性、原料丰富和成本低廉等优点,应用前景广阔。然而,目前解聚葡萄籽原花青素的理化方法存在环境污染、成本居高不下及得率低等诸多不足,因此亟需开发绿色高效的解聚方法以提高葡萄籽原花青素的利用率。本研究制备以葡萄籽原花青素、
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（U20A2062和32002349）; 吉林省青年成长科技计划项目（20210508011RQ）
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氧化应激是导致动物肝细胞结构和功能破坏以及机体组织损伤和器官病变的主要病理机制之一。寻找和开发高效的抗氧化制剂对于防治氧化应激引发的肝损伤类疾病具有重要意义。葡萄籽原花青素具有强抗氧化性、原料丰富和成本低廉等优点,应用前景广阔。然而,目前解聚葡萄籽原花青素的理化方法存在环境污染、成本居高不下及得率低等诸多不足,因此亟需开发绿色高效的解聚方法以提高葡萄籽原花青素的利用率。本研究制备以葡萄籽原花青素、酿酒酵母和发酵乳杆菌组成的复合菌液为主要成分,利用优化发酵培养基联合发酵,以期获得具有低聚原花青素的复合微生态制剂。实验选取葡萄籽原花青素粗提物为实验对象,从实验室自主分离并送检的酿酒酵母及乳酸菌中选定用于微生态制剂的菌种,使用酿酒酵母H2和发酵乳杆菌O与葡萄籽原花青素粗提物在发酵培养基中联合发酵,发酵前后粗提物溶液中的原花青素的平均聚合度（m DP）由6.845±0.1降低至4.767±0.27。随后,对制剂中菌种接种比和接种量、发酵培养基各成分和浓度和发酵条件进行单因素和响应面优化。通过优化确定了制备制剂的菌种接种比为酿酒酵母H2:发酵乳杆菌O为2:3,菌体接种量为7%;优化发酵培养基的成分为葡萄糖26.73g/L、蛋白胨10.52 g/L、酵母浸粉5.06 g/L、磷酸氢二钾2.0 g/L、柠檬酸铵2.0g/L、硫酸镁0.2 g/L;优化的发酵条件为温度为39.6℃、时间为37 h、摇床转速为116 rpm、初始p H为5.7。按优化方案进行制备后所得葡萄籽原花青素微生态制剂中原花青素m DP由优化前的4.767±0.27降低至3.972±0.047。经小鼠急性经口和亚慢性经口毒性试验证明该制剂安全无毒;体外自由基清除能力试验中该制剂显著提高了原花青素对2,2’-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）、二苯基苦基苯肼（DPPH）自由基的清除能力。随后,本实验探究了葡萄籽原花青素微生态制剂对CCl4引起的急性肝损伤的预防和治疗作用。结果表明,无论是造模前灌服还是造模后灌服葡萄籽原花青素微生态制剂,均能够减少小鼠肝脏表面脓点数,降低肝重及肝重比,降低血清中谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、肌酐（Cr）、乳酸脱氢酶（LDH）的活性,并增加肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和超氧化物歧化酶（SOD）酶活显著升高。而且,灌服葡萄籽原花青素微生态制剂的小鼠,HE染色切片中央静脉坏死面积减小,肝损伤面积占整个肝组织比例显著降低。本实验制备的制剂增强了葡萄籽原花青素清除氧化自由基的能力、提高抗氧化酶活性、增强机体抗氧化能力。
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