【摘 要】
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目的:探讨糖尿病患者外周血CD34+细胞、B2R、以及P53的表达水平;以及缓激肽对高糖环境下内皮祖细胞线粒体功能的影响和对P53基因表达的调控。方法:1.弋矶山医院心内科行冠脉造影阴性的病人中,选择有2型糖尿病患者20例,无糖尿病患者20例,用冠脉造影阴性的非糖尿病患者作为对照组。取得病人同意并签署知情同意书,经桡动脉抽取动脉血20ml。用淋巴细胞分离液从全血标本中分离出单核细胞,使用FITC标
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目的:探讨糖尿病患者外周血CD34+细胞、B2R、以及P53的表达水平;以及缓激肽对高糖环境下内皮祖细胞线粒体功能的影响和对P53基因表达的调控。方法:1.弋矶山医院心内科行冠脉造影阴性的病人中,选择有2型糖尿病患者20例,无糖尿病患者20例,用冠脉造影阴性的非糖尿病患者作为对照组。取得病人同意并签署知情同意书,经桡动脉抽取动脉血20ml。用淋巴细胞分离液从全血标本中分离出单核细胞,使用FITC标记CD34+细胞,抗体标记B2R及P53。将单核细胞分别与CD34抗体+特异性兔抗人B2R抗体、CD34抗体+兔抗人p53蛋白单克隆抗体、CD34抗体在冰上孵育1小时,然后与二抗1ul（BD,USA）孵育1小时。使用流式细胞仪检测CD34+的细胞数,B2R与P53的表达。2.培养C57BL/6J小鼠,并体外分离出骨髓源性内皮祖细胞,25mmo/L D-葡萄糖环境下分别使用不同浓度BK（0.1n M,1n M）干预,检测细胞内氧自由基生成、线粒体功能,B2R、P53蛋白和分子水平表达,AKT/P-AKT蛋白表达,表明BK对高糖环境下内皮祖细胞线粒体功能的影响和对P53基因表达的调控。3.使用信号阻断剂HOE-140阻断B2R信号通路,25mmo/L D-葡萄糖环境下使用BK进行干预。检测细胞内氧自由基生成、线粒体功能,B2R、P53蛋白和分子水平表达,AKT/P-AKT蛋白表达。4.使用PI3K拮抗剂LY294002阻断内皮祖细胞PI3K信号通路,25mmo/L D-葡萄糖环境下使用BK进行干预。检测细胞内氧自由基生成、线粒体功能,B2R、P53蛋白和分子水平表达,AKT/P-AKT蛋白表达,说明BK通过B2R/AKT信号通路减少氧自由基生成,保护线粒体,下调P53基因的表达。结果:1.糖尿病患者与非糖尿病患者的CD34+表达未见明显差异（0.2611±0.12879vs 0.3191±0.11405,P<0.05）,CD34+细胞在总人群中表达的比例在0.16%～0.54%（中位数:0.26%）,在冠脉造影阴性的患者循环CD34+细胞上,糖尿病患者的B2R表达低于非糖尿病患者（0.2453±0.11177 vs 0.5130±0.12797,P<0.05）,P53的表达高于非糖尿病患者（0.33474±0.175353 vs 0.10457±0.78290,P<0.05）。2.荧光检测和Western Blot检测结果显示高氧环境抑制了内皮祖细胞B2R的表达,促进了氧化应激及P53的表达。BK抑制了高氧环境下环境下氧化应激、P53的表达,BK通过依赖B2R的PI3K/AKT信号通路抑制细胞氧化应激及P53的表达。结论:1.糖尿病患者外周血CD34+细胞中,B2R的表达低于非糖尿病患者,P53的表达高于非糖尿病患者。2.BK通过B2R/PI3K/AKT信号通路抑制了内皮祖细胞氧化应激,下调了P53的表达,保护了线粒体功能。
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