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缢蛏(Sinonovacula constricta)是我国重要的经济养殖贝类,广泛分布于潮间带和河口地区。盐度和密度是缢蛏人工养殖中重要的影响因子,养殖密度过大或盐度不适宜均会对其生长和生存造成一定的影响。因此,研究缢蛏早期发育时期的最适盐度和最适密度对人工育苗具有重要意义。本文以缢蛏为研究对象,探究了不同密度和盐度环境下幼虫的变态率和存活率、稚贝的生长和代谢水平、幼贝的渗透调节能力和抗氧化水平,旨在为缢蛏高效育苗和养殖技术的建立提供一定参考。1.盐度对缢蛏生长发育和生理代谢的影响以缢蛏幼虫为实验对象,将D形幼虫和壳顶幼虫均设置4个盐度组,盐度分别为8、11、14、18,以变态率达到70%以上为实验结束,在显微镜下观察记录幼虫变态率和存活率。结果显示,D形幼虫培育盐度为8和11时,变态率较高,分别达到了(79.1%±1.1%)和(78.0%±3.7%),与另外两组具有显著差异(P<0.05),11盐度组的D形幼虫存活率最高(87.5%±1.1%);壳顶幼虫培育盐度为8和11时,其变态率较高,分别达到了(74.8%±1.6%)和(72.8%±3.1%),与另外两组具有显著差异(P<0.05),11盐度组的壳顶幼虫存活率最高(83.5%±1.6%)。以缢蛏稚贝为实验对象,设置了5个盐度组,分别为盐度12、16、20、24、28,进行为期28d的养殖实验,检测稚贝的生长性状、Na+/K+-ATPase(NKA)活性、己糖激酶(HK)活性和丙酮酸激酶(PK)活性。结果显示,12、16、20、24、28各盐度组稚贝壳长特定生长率(SGR)分别为6.1%/d、6.6%/d、6.1%/d、5.9%/d、5.7%/d,体质量特定增长率(SGR)分别为16.5%/d、17.5%/d、16.8%/d、16.3%/d、16.1%/d,其中16盐度组稚贝的壳长和体质量生长最快;NKA的活性随盐度的升高而呈现下降后升高的趋势,12和16盐度组NKA活性显著低于其他盐度组;HK和PK活性随盐度的升高呈先下降后上升的趋势,12和16盐度组的HK、PK酶活性显著低于其他组(P<0.05)。综上所述,缢蛏幼虫的最适养殖盐度范围为8~11,稚贝的最适养殖盐度范围为12~16。2.密度对缢蛏生长发育和生理代谢的影响以缢蛏幼虫为实验对象,D形幼虫和壳顶幼虫均设置3个密度组,D形幼虫密度设为5个/m L、10个/m L、15个/m L,壳顶幼虫密度设为3个/m L、6个/m L、9个/m L,以变态率达到70%为实验结束。结果显示,D形幼虫培育密度为5个/m L的变态率最高(76.1%±0.7%),5个/m L和10个/m L密度组的存活率较高,分别达到(87.6%±1.4%)和(86.3%±1.2%),显著高于15个/m L密度组(P<0.05);壳顶幼虫3个/m L和6个/m L密度组的变态率和存活率均较高,变态率分别达到(80.3%±1.6%)和(80.2%±1.2%),存活率分别达到(84.4%±1.7%)和(87.4%±1.6%)。以缢蛏稚贝为实验对象,设置4个密度组,分别为1×10~4粒/m~2、1.5×10~4粒/m~2、2×10~4粒/m~2、2.5×10~4粒/m~2,检测稚贝的生长性状、淀粉酶活性、纤维素酶活性、乳酸脱氢酶(LDH)活性和琥珀酸脱氢酶(SDH)活性。结果显示,各密度组稚贝壳长SGR分别为5.7%/d、5.3%/d、4.8%/d、4.3%/d,体质量SGR分别为14.0%/d、13.2%/d、12.3%/d、10.2%/d,其中密度1×10~4粒/m~2的稚贝壳长和体质量生长率最快;稚贝的淀粉酶活性和纤维素酶活性均随密度的升高呈下降趋势,两种消化酶的活性和稚贝的生长呈正相关;LDH活性呈现随密度的增加而升高的趋势;SDH活性则呈现随密度增加而降低的趋势。综上所述,缢蛏D形幼虫的最适养殖密度为5个/m L~10个/m L,壳顶幼虫的最适养殖密度为3个/m L~6个/m L,稚贝的最适养殖密度为1×10~4粒/m~2~1.5×10~4粒/m~2。3.盐度和密度对缢蛏渗透调节和抗氧化水平的影响以缢蛏幼贝为实验对象,共设置4个处理组,分别标记为A(60粒/m~2,盐度20)、B(60粒/m~2,盐度30)、C(120粒/m~2,盐度20)、D(120粒/m~2,盐度30),对各组进行72 h短期应激实验,在第6、12、24、48、72 h测定血淋巴离子浓度、抗氧化水平以及离子转运相关基因表达。结果显示,A组和C组缢蛏的血淋巴K+、Na+浓度始终处于稳定,B组和D组血淋巴K+、Na+浓度呈逐渐升高趋势,分别在第12 h和24 h达到最高并随后趋于平稳;密度和盐度对NKA活性的影响具有显著交互作用(P<0.05),B组、C组、D组Na+/K+-ATPase(NKA)活性均显著高于A组(P<0.05);在各时间点,各实验组超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量显著高于A组(P<0.05),且密度和盐度对SOD活性和MDA含量均有显著的交互作用(P<0.05);各实验组Na+/H+antiporter基因和V-ATPase基因的表达均显著高于A组(P<0.05),基因表达量随时间呈先升高后下降的趋势。