冬凌草素通过抑制NLRP3炎症小体形成减轻蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤

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目的:探讨冬凌草素对蛛网膜下腔出血后NLRP3炎症小体形成的影响。方法:将112只雄性C57BL/6J小鼠随机分组,分为6组,分组为:假手术组(sham组)、模型组(SAH组)、溶剂组(SAH+vehicle组)、模型+冬凌草素5mg/kg组(SAH+oridonin5mg/kg组)、模型+冬凌草素10mg/kg组(SAH+oridonin10mg/kg组)、模型+冬凌草素20mg/kg组(SAH+oridonin20mg/kg组)。使用颈内动脉线穿法建立小鼠SAH模型。除假手术组及模型组外,术后30min腹腔注射不同浓度冬凌草素,溶剂组腹腔注射二甲基亚砜溶液。24h后进行平衡木评分、改良Garcia评分、SAH分级、检测脑水肿情况,根据神经功能评分及脑水肿改善情况选出最佳剂量,进行免疫荧光观察小胶质细胞活化情况,TUNEL染色检测神经元凋亡数量的情况,Western blot检测NLRP3炎症小体、ASC、caspas-1、IL-1β、IL-18以及凋亡相关蛋白Bax、caspase-3的蛋白表达,将实验结果使用统计软件进行分析。结果:1.神经功能评分、SAH分级:平衡木评分及改良Garcia评分结果显示,与假手术组相比,模型组(SAH组)和溶剂组(SAH+vehicle组)的平衡木评分及改良Garcia评分明显降低(P<0.05),与溶剂组相比,冬凌草素三个剂量都可以显著升高平衡木及改良Garcia评分,其中冬凌草素10mg/kg组效果更明显(P<0.05)。与溶剂组相比,冬凌草素可以使SAH等级明显降低(P<0.05),其中冬凌草素10mg/kg效果最佳(P<0.05)。2.脑水含量:与假手术组相比,模型组及溶剂组脑水含量明显增高(P<0.05),与溶剂组相比,冬凌草素可以显著的降低SAH后的脑水含量,其冬凌草素10mg/kg组效果最明显(P<0.05)。3.TUNEL染色:与假手术组相比,模型组和溶剂组的神经元凋亡明显增加,与溶剂组相比,冬凌草素可以使神经元凋亡的数量明显减少。4.Iba-1免疫荧光染色:与假手术组相比,模型组和溶剂组小胶质细胞数明显增加,与溶剂组相比,冬凌草素可以使小胶质细胞数量明显减少。5.Western blot结果:与假手术组相比,模型组和溶剂组的NLRP3炎症小体、ASC、caspas-1、IL-1β、IL-18以及凋亡相关蛋白Bax、caspase-3的表达升高(P<0.05),与溶剂组相比,冬凌草素10mg/kg组的NLRP3炎症小体、ASC、caspas-1、IL-1β、IL-18以及凋亡相关蛋白Bax、caspase-3的表达明显减低P<0.05)。结论:冬凌草素可以通过降低NLRP3炎症小体的形成,减少神经元凋亡和小胶质细胞活化,改善了SAH后的早期脑损伤。
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