日粮色氨酸对断奶仔猪生长性能、肠道屏障功能、微生物区系和防御ETEC侵袭的影响研究

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本试验旨在研究日粮色氨酸对断奶仔猪生长性能、肠道屏障功能、微生物区系和防御产肠毒素性大肠杆菌K88(ETEC K88)侵袭的影响。试验选取60头21日龄断奶仔猪(杜×长×大),随机分配到4组中(每组15个重复,每个重复1头):0.14%色氨酸+K88攻毒组(LTK)、0.35%色氨酸+K88攻毒组(HTK)、0.14%色氨酸组(LT)、0.35%色氨酸组(HT),试验期共28天,第22天攻毒组口服1 m L 10~9cfu/m L的ETEC K88。1.日粮添加高色氨酸对ETEC攻毒断奶仔猪生长性能的影响高色氨酸组仔猪的末重、日增重、日采食量均显著高于低色氨酸组(P<0.05),FCR显著低于低色氨酸组(P<0.05)。ETEC攻毒显著降低低色氨酸组仔猪的末重、日采食量、日增重(P<0.05),ETEC攻毒对高色氨酸组仔猪的日采食量和日增重无显著影响(P>0.05)。高色氨酸组仔猪的腹泻率和腹泻指数均显著低于低色氨酸组(P<0.05),ETEC攻毒显著增加了低色氨酸组腹泻率和腹泻指数(P<0.05),ETEC攻毒对高色氨酸组仔猪的腹泻率和腹泻指数均无显著影响(P>0.05)。2.日粮添加高色氨酸对ETEC攻毒断奶仔猪血清免疫指标的影响未攻毒时,高色氨酸组仔猪血清的IL-8显著低于低色氨酸组(P<0.05),IL-10、Ig A、Ig G、Ig M显著高于低色氨酸组(P<0.05)。ETEC攻毒后,低色氨酸组仔猪血清的IL-6、TNF-α、IL-8显著高于高色氨酸组(P<0.05),IFN-γ、IL-10、Ig A、Ig G、Ig M显著低于高色氨酸组(P<0.05)。ETEC攻毒后,低色氨酸组仔猪血清的IL-6显著升高(P<0.05),IFN-γ、IL-10、Ig A、Ig G、Ig M显著降低(P<0.05)。ETEC攻毒后,高色氨酸组仔猪血清的Ig G、Ig M显著升高(P<0.05),IL-6和TNF-α显著降低(P<0.05)。3.日粮添加高色氨酸对ETEC攻毒断奶仔猪色氨酸代谢相关物质的影响高色氨酸组仔猪的血清Trp、IDO、Kyn、D-LA、ET、UN均显著低于低色氨酸组(P<0.05),5-TH、TPH、GH、IGF-1均显著高于(P<0.05)低色氨酸组。ETEC攻毒使低色氨酸组仔猪血清的IDO、Kyn、D-LA、ET显著升高(P<0.05),TPH、UN、GH、IGF-1显著降低(P<0.05)。ETEC攻毒使高色氨酸组仔猪血清的Trp、IDO、Kyn、TPH、ET、UN、IGF-1显著降低(P<0.05),GH显著升高(P<0.05)。ETEC攻毒对5-TH无显著影响(P>0.05)。4.日粮添加高色氨酸对ETEC攻毒断奶仔猪抗氧化指标的影响高色氨酸组仔猪的血清SOD、CAT、GSH-PX显著高于(P<0.05)低色氨酸组,MDA显著低于(P<0.05)低色氨酸组。攻毒后低色氨酸组仔猪血清的MDA显著升高(P<0.05),CAT及GSH-PX显著降低(P<0.05)。ETEC攻毒后高色氨酸组仔猪血清的CAT及GSH-PX显著升高(P<0.05)。5.日粮添加高色氨酸对ETEC攻毒断奶仔猪肠道形态的影响低色氨酸组仔猪空肠和回肠黏膜绒毛断裂片段较多,破损严重,而高色氨酸组绒毛排列整齐紧密,轮廓清晰,结构更完整,回肠中四个组绒毛均无较大破损脱落,排列紧密整齐。高色氨酸组仔猪空肠、回肠、结肠的VH和VH/CD比值均显著高于低色氨酸组(P<0.05)。ETEC攻毒使空肠的CD显著升高(P<0.05),VH/CD比值均显著降低(P<0.05)。ETEC攻毒使低色氨酸组回肠的VH/CD比值及结肠的VH、VH/CD比值显著降低(P<0.05)。6.日粮添加高色氨酸对ETEC攻毒断奶仔猪粪便中ETEC毒力基因相对表达量的影响未攻毒时仔猪粪便微生物中K88、LT、STa基因的表达无显著差异(P>0.05),ETEC攻毒后K88、LT、STa基因的表达显著差升高(P<0.05)。ETEC攻毒后高色氨酸组仔猪粪便微生物中的K88和LT基因表达均显著低于低色氨酸组(P<0.05),STa基因在攻毒两组间的表达无显著差异(P<0.05)。7.色氨酸促进断奶仔猪肠黏膜BD表达对ETEC侵袭的防御机制在仔猪空肠黏膜中:提高色氨酸浓度后,BD-1、BD-2、BD-127、BD119、ACE-2、SLC-A19的mRNA表达均显著提高(P<0.05);ETEC攻毒后,高色氨酸组BD-127和BD-119的mRNA表达均显著高于低色氨酸组(P<0.05)。在仔猪回肠黏膜中:提高色氨酸浓度后,BD-1、BD-127、SLC-A19的mRNA表达显著升高(P<0.05);ETEC攻毒后,高色氨酸组BD-1、BD-127、BD-119的mRNA均显著高于低色氨酸组(P<0.05),且攻毒后低色氨酸组BD-1、BD-119的mRNA也显著降低(P<0.05);ETEC攻毒后空肠和回肠黏膜ACE-2和SLC-A19的mRNA均显著降低(P<0.05)。在仔猪空肠黏膜中:ETEC攻毒后,高色氨酸组的AHR浓度有高于低色氨酸组的趋势(P=0.06),低色氨酸组的AHR无显著变化;ETEC攻毒后,高色氨酸组的AKT浓度高于低色氨酸组,但是差异不显著(P=0.24);ETEC攻毒后,低色氨酸组的RHEB浓度显著升高(P<0.05),色氨酸浓度对RHEB无显著影响(P=0.56)。在仔猪回肠黏膜中:高色氨酸组的AHR、AKT浓度均显著高于低色氨酸组(P<0.05),且攻毒后高色氨酸组的AKT也显著高于低色氨酸组(P<0.05);ETEC攻毒使低色氨酸组的AKT浓度显著降低(P<0.05);色氨酸及攻毒对RHEB浓度无显著影响(P=0.56)。8.日粮添加高色氨酸对ETEC攻毒断奶仔猪结肠微生物群落的影响仔猪结肠微生物Alpha多样性分析中Chao1、observed_species、Goods_coverage、Shannon、Simpson指数显示各组间物种丰富度均无显著差异(P=0.28,P=0.14,P=0.35,P=0.37,P=0.84),PCoA分析证明各组间结肠微生物群落组成存在显著差异(P<0.05),相同浓度色氨酸组样品微生物组成更相似。仔猪结肠微生物的门类中:提高色氨酸浓度后,Spirochaetes、Fusobacteria和Fibrobacteres相对丰度显著降低(P<0.05);ETEC攻毒后,低色氨酸组的Fibrobacteres相对丰度显著降低(P<0.05),Patescibacteria显著升高(P<0.05);ETEC攻毒后,高色氨酸组Tenericutes相对丰度显著降低(P<0.05)。色氨酸浓度及攻毒对其他主要门类均无显著影响。仔猪结肠微生物的属类中:提高色氨酸浓度后Megasphaera、Prevotella_9、Lactobacillus、Phascolarctobacterium、Faecalibacterium、Prevotella、Subdoligranulum相对丰度均显著升高(P<0.05),Christensenellaceae_R-7_group、Succiniclasticum、Ruminococcaceae_NK4A21_group、Clostridium_sensu_stricto_1显著降低(P<0.05);ETEC攻毒后,低色氨酸组的Clostridium_sensu_stricto_1显著升高(P<0.05);ETEC攻毒后,高色氨酸组的Megasphaera和Subdoligranulum显著降低(P<0.05)。总结可得,日粮色氨酸补充能促进断奶仔猪肠道屏障健康,提高生长性能,提高机体抗氧化能力,提高免疫力,减少肠道ETEC定殖,降低仔猪腹泻发生,增加抗菌肽表达,能够增加有益菌且减少有害菌的相对丰度,增强断奶对致病性大肠杆菌侵袭的防御作用,机体整体健康及生长性能得到了较好的提升。色氨酸促进BD表达应对ETEC攻毒的防御过程中,其途径为:Trp/Kyn-AHR-IL-17-PI3K/PDK1-AKT-IKKα-NF-κB-S6K1/4EBP1-BD。
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