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目的:1.了解目前与皱褶念珠菌(Candida rugosa)相邻的已知相关菌种之间在分类发育进化中的关系,进一步为该类菌种的系统分类提供更为准确的依据。2.探讨Candida rugosa及其相邻菌种Candida pseudorugosa、Candida neorugosa和Candida mesorugosa归为一类复合种的理论的准确性和合理性。3.结合念珠菌属中Candida rugosa等几类菌种重新归类为Diutina属的方案,对过去Candida rugosa及其相邻菌种种群中菌株的分类位置进行评估和修正,为今后在分类上鉴定该类未知菌株提供参考。方法:1.挑选Candida rugosa及其相邻菌株共24株,进行形态学鉴定。2.生理生化鉴定:对Candida rugosa及其相邻菌种的标准株进行API 20C酵母鉴定系统研究。3.采用美国临床实验室标准化研究所(CLSI)制定的M27-A3方案中的酵母菌微量稀释法,测定临床分离皱褶念珠菌及其相邻菌种菌株对两性霉素B(AMB)、5-氟胞嘧啶(5-FC)、氟康唑(FCZ)和伊曲康唑(ICZ)的敏感性。4.运用多位点序列分型方法(MLST)选取管家基因(ITS,LSU,rpb1,cox2,act1),对24株菌株及一株outgroup模式菌株进行以管家基因的碱基序列分析为依据的分子分类学研究。结果:1.供试菌株的形态学性状相似,呈奶油状白色光滑或皱褶菌落、镜下菌细胞呈椭圆形不规则排列;科玛嘉显色培养基除Candida pseudorugosa为紫绿色外,其余均为蓝绿色。2.在API 20C酵母菌鉴定系统中,Candida rugosa及其相邻菌种的菌株可利用碳源种类差异少,不足以从种间水平对其进行分类。3.Candida rugosa、Candida mesorugosa和Candida pseudorugosa对两性霉素、伊曲康唑、氟康唑和5-氟胞嘧啶均有很高的敏感性;Candida neorugosa对伊曲康唑剂量依赖性型敏感,而对其他三种广谱抗真菌药物都敏感。4.MLST所得到的系统发育树与基于ITS单基因序列构建的系统发育树相比,在种内菌株亲缘关系的分化差异程度高,具有明显的分类多样性。通过MLST所得复合基因系统发育树上24株供试菌株呈明显3个分支:A簇(Candida rugosa及Candida mesorugosa所有菌株)、B簇(Candida neorugosa)和C簇(Candida pseudorugosa)。5.所研究菌种标准株在系统发育树上的位置与文献中报道结果一致,进一步验证了Candida rugosa及其相邻3类菌种归为Diutina属的合理性,本研究对相关菌株作出了相应的属名更改。6.Diutina mesorugosa和Diutina rugosa菌株间的形态特征无差异性;碳源同化能力一致;在MLST系统发育树中,现命名为Diutina mesorugosa的7株菌株在系统发育树中均属于Diutina rugosa分支;Diutina rugosa和Diutina mesorugosa的复合基因序列同源性范围是98.1%~98.9%。结论:1.MLST分析能够更准确的推测近缘菌种间的进化亲缘关系。2.结合属名更改文献报道,建议将Diutina mesorugosa(原命名Candida mesorugosa)归入Diutina rugosa(原命名Candida rugosa)这一菌种分类范围内,Diutina neorugosa(原命名Candida neorugosa)和Diutina pseudorugosa(原命名Candida pseudorugosa)则仍应被视为Diutina属下的不同菌种。3.对于某些分化程度较高的酵母菌目菌株的分类研究不能仅依赖于ITS、LSU等单基因分析,应结合相应的形态学鉴定、生理生化鉴定及多基因联合分类分析等方法综合分析来进行判断。