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[目 的]急性心肌梗死（Acute Myocardial Infarction,AMI）是严重危及患者生命的心脏疾病,其死亡率总体呈上升趋势,目前经皮冠状动脉内介入治疗为AMI的最佳治疗方案,大多数急性心肌梗死患者接受了冠脉内支架植入术。手术治疗过程中可导致血管内皮细胞（Vascular Endothelial Cells,VECs）损伤,进而引起内部弹性纤维板断裂,促使血管平滑肌细胞（Vascular Smooth Muscle Cells,VSMCs）增殖移位至内膜,进而新内膜增生及细胞外基质沉积在管腔内,导致冠脉内再狭窄的并发症发生,约10%的患者经历了冠脉内再狭窄的并发症。为抑制VSMCs增殖,植入的支架表面涂层有广谱抗细胞增殖药物,这类药物在抑制VSMCs增殖的同时能影响VECs的生长,导致支架周围内皮化不全,金属支架裸露于血管腔,易发生冠脉内血栓事件。为预防冠脉内血栓事件发生,患者需服用双联抗血小板药物一年,长时间服药随之带来了出血风险的增加。由此可见冠脉内再狭窄、冠脉内血栓的并发症发生与VSMCs过度增殖以及支架内皮化延迟有关。钙库操纵型钙通道（Store-Operated Calcium Channel,SOCC）是真核细胞中钙离子的主要来源之一。SOCC开放介导钙内流,被称之为钙库操纵型钙内流（Store-Operated Calcium Entry,SOCE）。SOCE 在 VSMCs 和 VECs 增殖中起着重要作用。目前发现组成SOCC的主要分子有基质相互作用分子STIM、钙释放激活钙调节器Orai以及经典瞬时受体电压通道TRPC。位于质膜上的Orai与发生结构变化并移位至与质膜邻近地方的钙离子感受器STIM结合,使SOCC开放介导钙内流。故我们希望在Orai家族中寻找某一分子靶点,过表达或抑制这一分子靶点可抑制VSMCs的过度增殖而不影响VECs的增殖,进而预防支架植入术后冠状动脉内再狭窄以及冠状动脉内血栓事件,并进一步缩短双联抗血小板药物治疗时间。[方 法]选用购买的原代培养人冠状动脉内皮细胞（Human Coronary Artery Endothelial Cells,HCAECs）和人冠状动脉平滑肌细胞（Human Coronary Artery Smooth Muscle Cells,HCASMCs）为实验用细胞,使用 RT-qPCR 和 Western blot的方法检测HCAECs和HCASMCs的Orai家族中三个基因Orail、Orai2、Orai3分别在mRNA转录水平和蛋白表达水平的表达量;根据检测情况筛选两组细胞中存在差异性表达的基因进行下一步RNA干扰实验。通过质粒转染siRNA建立低表达目标基因的细胞系,并使用荧光显微镜和Western blot检测转染效率。使用钙回填实验了解目标基因干扰后对细胞钙离子内流的影响。采用PCNA和活细胞计数检测RNA干扰目标基因后对HCAECs和HCASMCs的增殖影响情况。[结 果]1.RT-qPCR检测结果:Orai1在HCAECs中的转录水平高于HCASMCs,差异显著,有统计学意义（P<0.01）。Orai2、Orai3在HCAEC中的转录水平与HCASMCs,无显著差异（P>0.05）。2.Western Blot检测结果:Orai1在HCAECs中的蛋白表达水平高于HCASMCs,差异显著,有统计学意义（P<0.01）。Orai2、Orai3在HCAECs中的蛋白表达水平与HCASMCs无显著差异（P>0.05）。3.转染Orai1-siRNA至两种细胞中,在荧光显微镜下观察转染后的HCAECs和HCASMCs,在HCAECs中的转阳率为75%,HCASMCs中的转阳率为75%。通过WB检测干扰后的HCAECs和HCASMCs中Orai1的蛋白表达水平较阴性对照组（NC）和空白对照组（CG）明显降低,差异显著,有统计学意义,（P<0.01）。4.钙回填结果:在HCAECs中,与NC和CG组对比,siOrai1组中钙离子内流明显受抑制,有统计学意义（P<0.01）。在HCASMCs中,与NC和CG组对比,siOrai1组中钙离子内流明显受抑制,有统计学意义（P<0.01）。5.PCNA实验结果:si-Orai1后,HCAECs细胞中PCNA蛋白表达水平较NC组和CG组明显降低,有统计学意义（P<0.01）。HCASMCs中PCNA蛋白表达水平较NC组和CG组明显降低,有统计学意义（P<0.010）。两组细胞间增殖情况对比差异不显著,无统计学意义（P>0.05）。6.活细胞计数结果:与NC和CG组对比,siOrai1组中HCAECs细胞增殖速率明显下降,有统计学意义（P<0.01）。与NC和CG组对比,siOrai1组中HCASMCs细胞增殖速率明显下降,有统计学意义（P<0.01）。两组细胞间细胞增殖速率的差异对比不显著,无统计学意义（P>0.05）。[结论]1.Orai家族中仅Orai1在HCAECs及HCASMCs中有差异性表达。2.Orai1-siRNA使HCAECs和HCASMCs钙内流明显受抑制。3.Orai1-siRNA 可抑制 HCAECs 及 HCASMCs 的增殖。4.Orai1-siRNA对HCAECs和HCASMCs的增殖影响无明显差异。