【摘 要】
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[目的]探究灯盏乙素（scutellarin,SCU）对激活的小胶质细胞介导的星形胶质细胞 Sl00 Ca2+结合蛋白 B（calcium-binding protein B,S100B）的影响,以及JAK2/STAT3信号通路对星形胶质细胞S100B的调控作用。[方法]体外实验采用BV-2小胶质细胞株体外培养,给予脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）激活BV-2小胶质细胞,分为
【基金项目】
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国家自然科学基金（81960223）
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[目的]探究灯盏乙素（scutellarin,SCU）对激活的小胶质细胞介导的星形胶质细胞 Sl00 Ca2+结合蛋白 B（calcium-binding protein B,S100B）的影响,以及JAK2/STAT3信号通路对星形胶质细胞S100B的调控作用。[方法]体外实验采用BV-2小胶质细胞株体外培养,给予脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）激活BV-2小胶质细胞,分为对照组（Con）、LPS组（LPS）、LPS+灯盏乙素预处理组（LPS+S）。提取上述组分的条件培养基孵育TNC-1星形胶质细胞,分为对照组（Con）、条件培养基组（CM）、条件培养基+灯盏乙素预处理组（CM+S）,共3组。Western Blot和荧光双标染色检测BV-2小胶质细胞STAT3、磷酸化STAT3（p-STAT3）和白介素10（IL-10）的表达以及TNC-1星形胶质细胞JAK2/STAT3信号相关蛋白:磷酸化JAK2（p-JAK2）、JAK2、p-STAT3、STAT3和炎症相关因子S100B的表达。并用JAK2/STAT3信号通路抑制剂α-氰基-（3,4-二羟基）-N-苄基霉素-烟酰胺（AG490）预处理后,Western Blot和荧光双标染色检测上述指标的表达变化。体内实验采用微创开颅法复制大鼠大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型,随机分为假手术组、MCAO组、MCAO+灯盏乙素组,共3组,于术后1d、3d和7d取材。Western Blot和免疫荧光染色检测各组大鼠大脑皮质星形胶质细胞中上述指标的表达。[结果]体外实验:（1）激活的小胶质细胞实验结果:Western Blot和荧光双标染色结果显示:LPS组的p-STAT3、IL-10表达显著增强,与对照组差异显著（p＜0.05）;灯盏乙素组p-STAT3表达明显降低,IL-10的表达进一步增高,与LPS组有显著差异（p＜0.05）。AG490和灯盏乙素具有协同作用。此外,STAT3在各组的变化无统计学意义。（2）激活的小胶质细胞条件培养基对星形胶质细胞的影响:①Western Blot和免疫荧光染色结果显示:CM组S100B的表达明显高于对照组（p＜0.05）;灯盏乙素能显著降低S100B表达,与CM组比较有显著性差异（p＜0.05）。②Western Blot和免疫荧光染色结果显示:CM组与对照组比较,p-JAK2、p-STAT3表达明显增高（p＜0.05）;灯盏乙素组p-JAK2、p-STAT3表达进一步增高,与CM组比较差异显著（p＜0.05）。JAK2和STAT3在各组间的表达无明显差异（p＞0.05）。③Western Blot和免疫荧光染色结果显示:使用JAK2/STAT3信号通路抑制剂AG490联合灯盏乙素预处理后,p-JAK2、p-STAT3表达显著降低、S100B表达明显升高,与CM+S组比较差异有统计学意义（p＜0.05）。体内实验结果:①ELISA和免疫荧光染色结果显示:在1d、3d和7d MCAO大脑皮质星形胶质细胞S100B蛋白表达均明显增高,与假手术组比较有显著性差异（p＜0.05）,灯盏乙素治疗组各个时间点与MCAO组相比,S100B均明显降低,差异有统计意义（p＜0.05）。②Western Blot和免疫荧光染色结果显示:在1d、3d和7d MCAO组p-JAK2、p-STAT3表达增强,与假手术组差异显著（p＜0.05）;灯盏乙素组p-JAK2、p-STAT3表达进一步增强,与MCAO组比较有统计学差异（p＜0.05）。JAK2和STAT3在各组间的表达无明显变化（p＞0.05）。[结论]（1）灯盏乙素可能通过STAT3信号调控BV-2小胶质细胞抗炎因子IL-10,进而介导TNC-1星形胶质细胞的反应性。（2）灯盏乙素可能经JAK2/STAT3信号通路调节BV-2小胶质细胞介导的TNC-1星形胶质细胞和大鼠脑缺血激活的星形胶质细胞中S100B蛋白的表达。
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