DNA是生物体最基本的过程。DNA分子每天都会受到许多元素攻击,这些攻击来源于细胞内部和外源因素,这些攻击使得DNA结构发生变化,往往导致生物体发生基因损伤,当DNA损伤修复机制未能完全修复损伤时,将会引起细胞癌变或者死亡。在细胞周期中,DNA链间交联(ICLs)是一种绝对闭锁的基因损伤,它会阻碍细胞的转录和复制,妨碍细胞周期的完成。细胞中存在的修复方式中有一种是特异性对ICLs敏感的信号通路,被称为范可尼贫血信号通路,该通路可以介导多种修复方式应对ICL损伤。目前已发现17中范可尼贫血症相关蛋白,它们都参与了ICLs损伤修复,其中FANCM蛋白除了参与范可尼贫血信号通路之外,它本身对于ICLs修复有着关键作用。FANCM/MHF复合蛋白的移位酶活性可介导ICLs修复的主要模式——复制叉横移——帮助复制叉跨过ICLs损伤位点从上游DNA转移到下游DNA。MCM解旋酶是目前发现哺乳动物中唯一与复制相关的六元环解旋酶,它仅在与Cdc45和GINS蛋白结合以后,填补六元环的缺口导致构象改变时,才可以激活MCM的解旋酶活性。本文将利用光交联剂Dig-TMP对细胞进行交联损伤研究DNA交联损伤下的解旋机制。本文以FANCM蛋白为主要研究对象,通过体内蛋白互作验证技术——免疫共沉淀和邻位连接技术来研究:ICLs相关移位酶FANCM与解旋所必需的解旋酶MCM之间的关系以及CMG复合体遇到ICLs时的开环机制。我们发现FANCM蛋白与CMG复合体中的MCM蛋白、Cdc45蛋白之间存在一个相互作用,而这个作用是依赖于ATR,只有被磷酸化的MCM2才能够与FANCM蛋白互作。令我们惊喜的是GINS复合蛋白从CMG复合体中掉落,进一步研究发现,FANCM蛋白和GINS蛋白不能同时与MCM蛋白和Dig-TMP相互作用。这表明当细胞遇到ICLs时会激活ATR,同时招募FANCM蛋白聚集在ICLs位点,被ATR磷酸化的MCM蛋白可与FANCM蛋白相互作用并挤掉GINS复合蛋白,打开CMG的闭环,从上游DNA转移到下游DNA,解链ICL下游DNA。