~(90)Sr对体外增生性瘢痕成纤维细胞的增殖及功能的影响

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目的:采用不同剂量的放射性核素90Sr照射体外培养的增生性瘢痕的成纤维细胞,通过观察细胞凋亡率、细胞周期及细胞生物合成分泌功能的改变,探讨放射性核素90Sr防治瘢痕增生的作用机理。方法:体外培养人增生性瘢痕的成纤维细胞,将细胞分空白对照组(Orad)、高剂量照射组(1500rad)、中剂量照射组(1000rad)、低剂量照射组(500rad)。用放射性核素90Sr敷贴器按照射剂量进行实验干预。分别于照射前Oh、照射后24h、照射后48h、照射后72h收集细胞和细胞上清液。用流式细胞仪测定细胞周期的变化及细胞凋亡率;用MTT法绘制成纤维细胞的生长曲线;用ELISA(酶联接免疫吸附剂测定)的方法检测细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ胶原、MMP-1、TGF-β1的表达变化。结果:①细胞凋亡方面:高剂量和中剂量照射后细胞凋亡率呈逐渐上升趋势,至72h分别为61.61±1.56%和64.02±3.21%且两组差异不明显(P>0.05)。低剂量照射后24h、48h细胞凋亡率逐渐上升,而72h凋亡率迅速下降至16.53±0.91%且与其它组比较有显著差异(P<0.01)。②细胞周期方面:照射后24h,低、中剂量两组在细胞各个周期中的比率无显著差异(P>0.05),而高剂量照射后首先诱导细胞进入了S期。随着时间的推移,照射后72h,高、中剂量两组细胞明显阻滞在了S期,与对照组有显著性差异(P<0.05)。③生长曲线方面:高剂量和中剂量照射后生长曲线低平,而低剂量照射后曲线较对照组低,但总体上是一个上升趋势,特别是在照射后48h至72h曲线上升坡度较大,说明细胞增殖恢复较快。④Ⅰ型胶原方面:照射剂量越大,Ⅰ型胶原浓度就越低。照射后24h、48h、72h三个时间点各实验组的Ⅰ型胶原浓度值均有显著性差异(P<0.05)。高剂量、中剂量、空白对照三个组在Oh、24h、48h、72h的Ⅰ型胶原浓度变化均有显著性差异(P<0.05),高剂量和中剂量对Ⅰ型胶原浓度的降低较明显。⑤Ⅲ型胶原方面:照射剂量越大,Ⅲ型胶原浓度越高。照射后24h、48h、72h各实验组Ⅲ型胶原的浓度值均有显著性的差异(P<0.05);四个实验组在Oh、24h、48h、72h的Ⅲ胶原的浓度变化均有显著性差异(P<0.05)。⑥在MMP-1方面:照射后48h三个照射组的MMP-1的浓度值均高于空白对照组(P<0.05),且照射剂量越大,MMP-1浓度就越高。照射后72h,低剂量组随着细胞功能的恢复MMP-1的浓度下降,与对照组无差异(P>0.05)。⑦在TGF-β1方面:照射剂量越大,TGF-β1浓度值越小。照射后24h、48h、72h三个时间点的各实验组的TGF-β1浓度值均有显著性差异(P<0.05)。四个实验组在Oh、24h、48h、72h的TGF-β1浓度变化均有显著性差异(P<0.05)。结论:放射性核素90Sr抑制成纤维细胞增殖,促进其凋亡增加;减少Ⅰ型胶原蛋白,增加Ⅲ型胶原蛋白合成,改变了Ⅰ/Ⅲ胶原比例;增加了MMP-1,从而加强了对胶原的降解;减少TGF-β1的合成。由此可见90Sr抑制瘢痕的生长是通过对瘢痕细胞和细胞外基质共同作用的结果。
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