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大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)是最常见的人畜共患病原菌之一,鸡群肠道中的大肠杆菌随粪便进入舍内空气中,以空气为媒介进行扩散,不断聚积,导致舍内空气大肠杆菌浓度升高,污染鸡舍环境,舍内大肠杆菌随鸡群呼吸再次进入体内引起大肠杆菌病的爆发。同时长期使用抗生素致使耐药性增强,临床治疗困难,给养鸡业造成巨大的损失,甚至危及鸡群健康和养殖人员的安全。当前对于鸡舍耐药大肠杆菌的研究较少,为了解现代规模化鸡场空气中大肠杆菌的耐药性与耐药基因携带情况并探寻五倍子水提物对大肠杆菌耐药基因的mRNA表达水平的影响,本研究以从鸡舍空气中分离的大肠杆菌分离株为研究对象,对其耐药表型、耐药基因携带情况、16S rRNA甲基化酶基因rmtB的遗传进化情况以及五倍子水提物处理后的耐药基因表达变化的情况进行探究,以便掌握鸡舍空气中大肠杆菌的耐药现状,同时为中药解决大肠杆菌耐药性提供试验依据。方法:采用自然沉降法采集部分规模化养鸡场空气中大肠杆菌并分离纯化,通过传统鉴定方法(形态学特性、生化特性等)和分子生物学方法进行鉴定;采用标准纸片扩散法对分离株进行耐药表型测定,采用PCR方法对大肠杆菌分离株进行耐药基因检测及对16S甲基化酶基因rmtB进行遗传进化分析;通过测定中药水提物的MIC以确定黄连、五倍子等11味中药对大肠杆菌的抑菌效果,选择抑菌效果最好的五倍子,采用浓度分别为1/2 MIC、1/4 MIC、1/8 MIC的五倍子水提物处理菌液,提取其总RNA,测定五倍子水提物处理前及不同浓度处理后的mRNA耐药基因表达水平的变化。结果:(1)本研究共分离鉴定出鸡舍空气环境中的大肠杆菌63株;舍内大肠杆菌分离株对苯唑西林和青霉素的耐药率高达93.65%,92.06%的大肠杆菌对庆大霉素产生耐药,多重耐药现象普遍,多重耐药率为98.41%。(2)耐药基因的检测发现,分离株普遍携带耐药基因,喹诺酮类和磺胺类耐药基因携带率达100%,其中,耐药基因qnrS的携带率最高,达100%。大部分菌株带有多种耐药基因,其中最多的可携带15种耐药基因,最少的携带4种耐药基因,携带13种耐药基因的菌株最多,占33.33%。(3)对16S rRNA甲基化酶基因rmtB进行系统进化研究发现,本次试验中采集的山东地区受试菌的rmtB耐药基因的变异程度不大;与NCBI数据库中的16S rRNA甲基化酶基因rmtB相比,变异的程度较大。(4)11味中药中五倍子的抑菌效果最好,黄芩次之,另外黄连,苦参,地锦草,连翘,金银花等7种中药的抑菌效果不明显,紫草和板蓝根对受试的大肠杆菌无抑菌效果。(5)对用浓度分别为1/2 MIC、1/4 MIC、1/8 MIC的五倍子水提物处理过的大肠杆菌的16S rRNA甲基化酶基因的基因表达水平进行测定发现,不同浓度的五倍子均可导致鸡舍大肠杆菌的armA和rmtB基因表达水平降低。结论:鸡舍空气环境中的大肠杆菌耐药性严重,多重耐药现象普遍,耐药基因携带率高;抑菌效果好的五倍子可降低鸡舍大肠杆菌的耐药基因的基因表达水平。