白介素-17RA(Interleukin 17receptor A,IL-17RA)是 IL-17 受体家族(IL17-RA、IL17-RB、IL17-RC、IL17-RD、IL17-RE)第一个被确认的Ⅰ型单次跨膜蛋白,广泛存在于体内组织细胞表面。它能够和IL17RB、IL-17RC形成杂聚肽异源受体复合物,介导由配体IL17-A、IL17-F和IL-17E(IL-25)引起的免疫应答和促炎因子的分泌。IL-17RA通过其胞内区段SEFIR募集衔接蛋白ACT1,形成IL-17RA-Act1-TRAF6信号复合物,激活下游通路,诱导炎性因子IL6、IL8、CXCL1等的表达分泌,并募集动员中性粒细胞,导致各种炎症疾病的发生。制备研发IL-17RA中和抗体药物,可以阻断IL-17RA信号通路,对相关疾病起到一定的治疗作用。本论文通过基因重组和抗体纯化技术获得高质量的抗hIL-17RA抗体,并对其生物学活性进行研究。本论文主要包括以下三部分:第一,hIL-17RA的构建及表达。该部分主要是构建IL-17RA真核表达载体pSTEP2-IL17RAh,并转染到HEK293E细胞中,利用镍离子亲和色谱分离纯化获得重组人IL-17RA蛋白,通过SDS-PAGE电泳确认蛋白的表达。第二,IL-17RA抗体的制备和鉴定。主要是通过噬菌体展示技术获得抗体基因文库,然后构建抗体表达质粒,转染至HEK293E细胞中表达。采用蛋白A亲和色谱分离纯化IL-17RA抗体,通过SDS-PAGE电泳、HPLC、质谱对抗体进行纯度分析和鉴定,采用OCTET系统检测抗体的亲和活性。第三,选取与天然蛋白结合活性最好的IL-17RA抗体并对其生物活性进行研究。采用流式细胞术、ELISA和Western blot研究抗体的结合作用和种属交叉反应,通过HFF-1和HT-29细胞上细胞因子分泌实验来检测抗体的中和活性。本研究成功制备了高纯度的人hIL-17RA-his重组蛋白,并用它作为免疫原成功获得4株抗hIL-17RA抗体。选取结合活性最好的一株进行生物活性研究发现它与其他物种有一定的交叉结合反应,能结合IL-17RA并有效阻断其与配体的结合,抑制了下游相关细胞因子IL6、IL8和CXCL1的分泌。该株hIL-17RA的中和抗体的成功制备,为IL-17RA相关疾病通路的研究提供了工具,也为IL-17RA靶点药物的开发奠定了一定的基础。