机体的天然免疫系统在抵抗病毒感染方面发挥着重要作用。病毒感染宿主细胞后，宿主细胞可以通过模式识别受体（pattern recognition receptor，PRR）侦测病原相关分子模式（pathogen-associated molecularpatterns，PAMPs）的存在，从而激活宿主的天然免疫反应，诱导干扰素（IFN）、促炎症细胞因子等一系列抗病毒因子的产生。Toll样受体（Toll-likereceptor，TLR）家族是一类重要的PRR，在RNA病毒的识别过程中发挥重要作用，如TLR3识别dsRNA：TLR7和TLR8识别ssRNA等。但由于TLR家族成员均为跨膜蛋白，只能识别细胞外或内体中的RNA病毒，对于细胞质中的RNA病毒，TLR则无法做出反应。RIG-Ⅰ样受体（RIG-I-like receptor，RLR）是一类新发现的PRR，能够识别细胞质中的病毒RNA，诱导干扰素和促炎症细胞因子的产生，对抗病毒天然免疫的建立起着至关重要的作用。　　 对人RIG-Ⅰ基因的结构、诱导干扰素产生的机制等已研究较为清楚，但有关猪RIG-Ⅰ的研究尚无报道，鉴于此，本研究对猪RIG-Ⅰ进行了克隆，并对其在诱导Ⅰ型干扰素中的作用做了初步研究。　　 主要研究内容如下：　　 1.猪RIG-Ⅰ基因克隆与序列分析。　　 取猪的外周血单核细胞总RNA作模板RT-PCR（一步法）扩增猪RIG-Ⅰ基因，插入pMD18-T载体中构建了克隆质粒pMD18-RIG-Ⅰ，序列分析发现猪RIG-Ⅰ开放读码框全长为2832 bps，编码943个氨基酸残基。与牛、马、人、黑猩猩、猴的氨基酸同源性分别为82.3％、80.2％、80.2％、79.7％、和78.8％，与小鼠、大鼠和鸭嘴兽的同源性较低，进化系统树分析也表明猪RIG-Ⅰ氨基酸序列与牛的亲缘关系最近。　　 2.猪RIG-Ⅰ基因全长及突变体重组质粒的构建。　　 以pMD18-RIG-Ⅰ为模板，PCR分别扩增RIG-Ⅰ全长编码区、RIG-ⅠN端以及RIG-ⅠC端编码区片段，将纯化后的PCR产物经BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后分别与经同样酶切的真核表达载体pCMV-Tag-2B连接，获得的重组质粒分别命名为Tag-RIG-Ⅰ，Tag-RIG-Ⅰ-N和Tag-RIG-Ⅰ-C。　　 3.猪RIG-Ⅰ在诱导干扰素产生中的作用。　　 将真核表达质粒Tag-RIG-Ⅰ、Tag-RIG-Ⅰ-N、Tag-RIG-Ⅰ-C分别转染PK-15细胞，通过荧光素酶报道系统检测发现所构建的猪RIG-Ⅰ基因的真核表达质粒能通过激活IRF3和NF-κB诱导β干扰素的产生，且单独的CARD区也能激活下游信号。而缺失CARD区的猪RIG-Ⅰ不能激活下游信号且负调控poly（1：C）诱导的β干扰素产生。