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本研究拟采用银杏叶提取物(Ginkgobilobaextract，EGb761)对除草剂百草枯(1，1’-二甲基-4,4-联吡啶阳离子，Paraquat，PQ)诱导的PC12细胞(具有DA能神经元特性)损伤施加干预，旨在证实EGb761对PQ所致神经元损伤的保护作用，并从细胞凋亡等病理过程揭示其可能的作用机制。实验内容如下：
实验一：筛选出PQ对PC12细胞损伤的有效浓度及EGb761对该浓度PQ损伤PC12细胞的有效保护浓度。
研究方法：设0、50、100、200、300、400、500、600μmol/LPQ浓度组孵育24h及PQ300μmol/L分别作用0、4、8、12、24、48、72h；EGb761保护设正常对照组、0、1、10、20、40、60、80、100mg/L剂量组，采用MTT比色法和乳酸脱氢酶(LDH)释放量测定法对各浓度进行筛选。
研究结果：经MTT比色法检测，与对照组相比，50、100、200、300、400、500、600μmol/LPQ组细胞生存率分别降至75.5％、69.6％、60.7％、52.3％、43.9％、25％、17％；PQ300μmol/L分别作用4、8、12、24、48、72h，其细胞生存率与对照组相比依次为85％、79.1％、72.8％、54％、35.9％、16.5％；对照组LDH的释放量为0.242±0.005，PQ组LDH释放量明显增高0.267±0.032(与正常对照组相比P＜0.05)，EGb761保护组抑制了PQ所引起的LDH释放量的升高，其中40、60mg/LEGb761组明显抑制了LDH释放量的升高，分别为0.243±0.0046、0.243±0.007(与PQ组相比P＜0.05)。
研究结论：PQ对PC12细胞具有损伤作用，且这种损伤具有剂量和时间依赖性；EGb761对PQ所引起的PC12细胞损伤具有一定的保护作用。
实验二：探讨PQ对PC12细胞的损伤作用，观测EGb761对该损伤的保护作用并探寻其作用机制。
研究方法：MTT比色试验检测细胞活性；LDH释放测定细胞损伤程度；TUNEL染色观测凋亡细胞DNA的断裂情况；免疫细胞化学染色观测细胞凋亡相关分子的表达。
研究结果：MTT法检测显示，EGb76120、40μg/ml均可明显抑制300μMPQ所引起的PC12细胞活性的降低，与PQ组相比具有显著性差异(P＜0.05)；300μmol/LPQ作用PC12细胞24h后，LDH释放量明显增多(236±8.8％)(与正常对照组相比P＜0.05)，使用10，20，40μg/mLEGb761保护可明显抑制PQ所致LDH释放量的升高(分别为223±10.3％，188±9.8％和145±8.6％)，其中20，40μg/mLEGb761保护组与PQ组相比差异具有显著性(P＜0.05)；300μmol/LPQ处理组(22％)与对照组(4.6％)相比显著增加了TUNEL阳性细胞与总细胞的比率，10、20、40μg/mlEGb761保护组降低了TUNEL阳性细胞与总细胞的比率，分别为19.4％、13.7％、9.1％；PQ作用24h后，PC12细胞的Caspase-3表达明显增强，染色细胞呈深棕黄色，阳性染色分布于胞质和突起中，着色细胞数目多，细胞形态改变，突起变短；EGb761保护组，细胞着色较浅，与PQ损伤组相比，细胞形态较为完好。
研究结论：EGb761可减轻PQ诱导的PC12细胞损伤和凋亡，该作用可能与其抑制Caspase-3蛋白酶的活性有关。
实验三：探讨EGb761对PQ诱导PC12细胞凋亡的保护作用。
研究方法：Giemsa染色观察细胞形态变化；流式细胞仪(FCM)测定细胞凋亡百分率；Hoechst33342染色观察细胞凋亡；Rhodamine123染色检测细胞线粒体膜电位(Mitochondrialmembranepotential，MMP)。
研究结果：Giemsa染色显示，PQ处理24h后，细胞数量减少，贴壁能力下降，突起变短，染色细胞核呈深紫色，并可见凋亡小体，部分细胞发生肿胀，胞膜损伤，呈现坏死现象；EGb76110、20、40μg/ml保护组，细胞贴壁较好，核染色淡而均匀，突起较长，胞膜基本完整，且随着EGb761浓度增加，PQ对细胞的损伤程度逐渐减小；FCM测得对照组、PQ组、10μg/mlEGb761组、20μg/mlEGb761组、40μg/mlEGb761组细胞凋亡百分率分别为6.3％、41.6％、34.8％、30.7％、25.7％，表明EGb761可有效抑制PQ诱导的PC12细胞凋亡；Hoechst33342染色显示，PQ组见大量浓染致密的凋亡细胞，且可见DNA荧光碎片，10、20、40μg/mlEGb761保护组，凋亡细胞明显减少，细胞荧光强度依次减低；PQ作用PC12细胞24h后，Rhodamine123染色示荧光强度明显减弱(23.2±5.26％)，表明细胞MMP显著下降；10、20、40μg/mlEGb761保护组荧光强度增强(分别为42.4±3.85％，65.42±4.07％和74.82±5.22％)，与PQ组相比均具有显著性差异(P＜0.05)。
研究结论：EGb761对PQ诱导的PC12细胞凋亡具有保护作用，抑制PQ引起的细胞MMP下降可能是其神经保护作用的机制之一。