本实验室前期已经从条叶龙胆中分离并筛选出对龙胆叶枯病菌具有较好拮抗作用的内生真菌LD421、LD455。本研究在此基础上,以提高对龙胆叶枯病的抑菌活性为目的,考察内生真菌LD421与LD455混合培养条件。同时考察发酵液的生防效果,进一步追踪LD421发酵液中主要抗菌活性成分,为生防真菌防治龙胆病害提供理论依据。以龙胆叶枯病菌为指示菌,采用生长速率法考察内生真菌LD421与LD455混合培养最佳条件,即培养方式、培养比例及培养时间。结果表明,内生真菌LD421与LD455的种子液以3:1的比例同时接入含300mLPD培养基的500mL锥形瓶中,发酵培养13天,抑菌活性达92.00%。温室生物防治采用盆栽的龙胆作为实验材料。实验组喷施供试内生真菌的灭活代谢液,阳性对照组喷施70%甲基托布津1000倍液,4个周期后分别接种叶枯病菌;对照组只接叶枯病菌;空白组不作处理。调查结果显示,混合培养组对叶枯病防效可达到88.59%,与70%甲基托布津组无显著性差异,且防效时间长;LD421发酵液对叶枯病防效可达到85.06%;LD455发酵液防效为75.93%,防治效果较低。田间生物防治采用二年生龙胆,实验组喷施供试内生真菌的灭活发酵液;阳性对照组喷施70%甲基托布津1000倍液;空白组正常浇水。田间防治效果表明,混合培养发酵液对龙胆叶枯病防效可达90.29%,7月初到9月中旬防治效果与70%甲基托布津组无显著性差异,病情指数显著低于空白组;LD421发酵液对龙胆叶枯病防效可达到90.00%,7月初到8月初防治效果与70%甲基托布津组无显著性差异;而LD455发酵液对叶枯病的防治效果较低,防效为79.15%。追踪LD421发酵液中抗叶枯病菌的生物活性物质。首先以对叶枯病菌的抑菌率为指标,筛选五种大孔树脂D101、D301、AB-8、HPD100、X-5,选定分离效果好的弱碱性阴离子吸附树脂D301。对抑菌活性的水洗脱、20%乙醇洗脱部位进行成分检识和TLC分析。采用尿素-SDS凝胶电泳法初步确定了 LD421代谢液中的糖肽类物质为抗龙胆叶枯病病原真菌的主要活性成分。