燕窝品质分析及印尼白燕盏糖蛋白的分离纯化与结构特性研究

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燕窝主要含有唾液酸糖蛋白、矿物质等营养物质,具有促进免疫、延缓衰老、抗病毒等功效。目前有关燕窝真伪鉴别的研究较多,对于燕窝的品质评价及其免疫活性方面的研究,不够全面和完善,国内外对燕窝特征性成分唾液酸糖蛋白的研究报道较少。本论文对印度尼西亚、马来西亚两个产地的共8种燕窝的品质进行了系统分析,并以印尼白燕盏为对象,进行了活性功能评价和建立燕窝糖蛋白提取纯化和分析的基本思路及方法。主要研究内容和结果如下:1.对印尼、马来两个产地的8种燕窝,分别测定了水分含量、蛋白质含量、唾液酸(Neu5Ac)含量、单糖组成、无机元素组成、氨基酸组成等指标,分析和比较了不同燕窝的营养成分及品质,发现不同燕窝的单糖组成、元素组成存在较明显差异,为进一步分析研究燕窝提供了思路和理论参考。2.以10mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg四个浓度的印尼白燕盏匀浆灌胃昆明鼠,选取免疫器官指数、血清溶血素水平、迟发型变态反应和腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬能力等四个代表性指标进行测定,根据阳性结果得出燕窝对免疫功能低下小鼠的体液免疫、细胞免疫和非特异性免疫方面的功能都有显著的促进作用,为阐明燕窝的保健功效和正确合理应用提供理论依据。3.对燕窝主要组分糖蛋白提取纯化,并进行了结构的初步分析。确定60℃水提的提取方法;以SDS-PAGE结合凝集素印迹为主要鉴定手段,选用DE52、DEAE650M、QFF阴离子交换,确定了燕窝糖蛋白的初步分离方法,并结合亲和层析进一步纯化,获得了单一的分子量接近43kDa的具有Neu5Acα2-3Galβ1-4GlcNAc/Glc糖链结构的唾液酸糖蛋白条带。为燕窝糖蛋白目标性化合物纯化、鉴定和活性评价选择依据和方法参考。4.对8种燕窝进行SDS-PAGE电泳和凝集素亲和印迹实验,利用凝集素对不同糖链结构的特异亲和特性,分析不同燕窝的唾液酸末端连接方式差异;根据特异性亲和结果可知大多燕窝都含有分子量50kDa和43kDa含Neu5Acα2-3Gal末端唾液酸结构的唾液酸糖蛋白,且43kDa分子量糖蛋白具有Neu5Acα2-3Galβ1-4GlcNAc/Glc结构,印尼白毛燕窝、马来龙牙盏还含有分子量分布于30kDa~40kDa之间含Neu5Acα2-6Galβ1-4GlcNAc糖链连接的唾液酸糖蛋白。二维电泳分析了两种代表燕窝的蛋白质点分布组成;重点鉴定了已纯化糖蛋白的唾液酸连接结构,使用MALDI-TOF MS获得蛋白部分肽段序列图谱,数据库未检索到匹配度较高结构,说明该部分蛋白质结构为新结构,未有报道和研究。
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