【摘 要】
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中药及其复方的化学成分复杂多样,获得中药各有效组分在某种效应上的最佳组合是组分中药开发和应用过程中的关键问题之一。本课题组在前期实验中发现萸黄连发挥抗肝癌作用的有效组分及其比例为小檗碱:巴马汀:药根碱=4:2:1,本课题就已经筛选出的萸黄连有效组分(小檗碱:巴马汀:药根碱=4:2:1)及其相应的单一成分体外抗肿瘤效果进行探究,明确该有效组分诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡线粒体通路的机制。本实验
【基金项目】
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黑龙江省博士后基金资助项目(LBH-Z13121); 哈尔滨商业大学科研基金启动基金资助项目(13DL024); 哈尔滨商业大学研究生创新科研项目(YJSCX-323HSD);
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中药及其复方的化学成分复杂多样,获得中药各有效组分在某种效应上的最佳组合是组分中药开发和应用过程中的关键问题之一。本课题组在前期实验中发现萸黄连发挥抗肝癌作用的有效组分及其比例为小檗碱:巴马汀:药根碱=4:2:1,本课题就已经筛选出的萸黄连有效组分(小檗碱:巴马汀:药根碱=4:2:1)及其相应的单一成分体外抗肿瘤效果进行探究,明确该有效组分诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡线粒体通路的机制。本实验采用MTT法检测萸黄连有效组分及单一成分对SMMC-7721肝癌细胞增殖的影响;荧光显微镜观察了萸黄连有效组分及单一成分作用后细胞的凋亡形态;流式细胞术法检测了萸黄连有效组分及单一成分作用细胞后的细胞凋亡率和活性氧水平以及细胞线粒体膜电位的变化;Western Blot法检测了萸黄连有效组分及单一成分对细胞内Cyt-C和Caspase-3的表达的影响;激光共聚焦显微镜检测了细胞内Ca2+含量;Real time PCR检测了细胞内Bax和Bcl-2基因mRNA表达情况。研究结果显示,萸黄连有效组分能显著抑制SMMC-7721肝癌细胞的生长,且随着有效组分浓度的增加,抑制率也升高。Hoechst33258染液染色后,荧光显微镜下观察到萸黄连有效组分组的细胞在镜下可见明显的凋亡小体,形态不完整,有明显破碎的现象。Annexin V/PI染色后流式细胞术检测到萸黄连有效组分组的细胞凋亡率为(27.26±0.75)%,明显高于单一成分给药组的凋亡率(P<0.01)。线粒体膜电位检测实验结果显示萸黄连有效组分组的线粒体细胞膜电位强度下降的较明显。Western Blot法检测萸黄连有效组分作用于SMMC-7721细胞24h后,Cyt-C和Caspase-3蛋白表达均有增加。激光共聚焦显微镜检测结果显示萸黄连有效组分能增加细胞内Ca2+的浓度。研究细胞内活性氧水平时发现萸黄连有效组分组的活性氧含量明显高于单一成分组。Real-time PCR实验结果显示萸黄连有效组分能明显降低Bcl-2基因mRNA表达,增加Bax基因mRNA表达,下调Bcl-2/Bax 比值。综上所述,萸黄连有效组分能抑制SMMC-7721肝癌细胞的生长增殖,增加细胞内活性氧水平,降低线粒体跨膜电位,引起细胞内Ca2+含量升高,激活Caspase-3,下调Bcl-2/Bax比值等表明萸黄连有效组分诱导SMMC-7721细胞凋亡的机制可能是通过线粒体途径。
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