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目的:本研究通过在体外细胞培养上,应用RNA干扰技术沉默ERK1/2基因后,分析其总的ERK基因的mRNAs、下游靶向蛋白表达、及其磷酸化水平变化,探讨胃泌素是否通过ERK1/2信号分子信号转导通路实现对大肠癌细胞增殖的调控,旨在进一步明确胃泌素调控大肠癌发生发展的分子机制,为部分激素依赖性大肠癌的个体化治疗提供理论依据。方法:通过慢病毒感染细胞构建CCKBR阳性的细胞稳转株CACO2,应用RTQ-PCR检测大肠癌细胞株CACO2中胃泌素受体(CCKBR)的表达情况,通过MTT法观察不同浓度五肽胃泌素对细胞生长的影响情况,由此确定五肽胃泌素作用于大肠癌细胞株CACO2浓度范围,实验共分四组:A组:为空白对照组,加入无血清培养基DMEM。B组:为阴性干扰组,无关阴性对照序列-shRNA转染细胞,4-6小时后换1%胎牛血清培养基DMEM,再培养24h。C组:为胃泌素组,加入含胃泌素(25.00mg/L)培养基DMEM。D组:为转染shRNA质粒干扰+胃泌素组,4-6小时后换含胃泌素(25.00 mg/L)培养基DMEM,再培养24h。由上海吉凯基因构建ERK1/2-shRNA,转染后观察转染效率,当转染效率达到30%或以上。接着使用MTT测试各组细胞增殖;再用Western blot法检测各组细胞中ERK1/2蛋白的表达水平。结果:胃泌素在6.25~200.00mg/L范围内能促进大肠癌CACO2细胞的凋亡,且当浓度达25.00 mg/L时为最佳浓度(P<0.05)。转染24小时后,观察荧光表达的细胞得出转染效率,当质粒与脂质体的质量比为1:2时转染效率为40%-50%之间。MTT检测到细胞增殖指数间存在差异,胃泌素组和阴性干扰+胃泌素中细胞ERK1/2蛋白表达水平组显著高于空白对照组和质粒干扰组的蛋白水平,而质粒干扰组的蛋白表达水平又高于空白对照组的ERK1/2蛋白表达水平。利用Western-blot检测四组ERK蛋白表达水平也存在差异(P<0.01)。结论:胃泌素能够促进体外大肠癌CACO2细胞增殖,同时ERK1/2蛋白的表达明显增高,而通过质粒干扰ERK1/2蛋白的表达后,大肠细胞CACO2的增殖明显减弱,进一步论证了胃泌素通过ERK1/2信号通路实现促进大肠癌细胞CACO2的生长调控。