虾及其制品以其较高的营养价值和独特风味,越来越受到人们的青睐,但由于虾是极易致敏的食物之一,严重威胁着人类的健康,因此开展虾过敏原蛋白的相关研究具有十分重要的经济和社会效益。本研究选用刀额新对虾(Metapenaeus ensis)作为研究对象,应用硫酸铵分段盐析法从虾蛋白粗提液中初步提取刀额新对虾过敏原蛋白,再用Sephadex G-100凝胶柱层析对初提物进行纯化。结果显示:pH 6.54,饱和度为40%的硫酸铵分段盐析沉淀组分经Sephadex G-100凝胶柱层析得到单一洗脱峰,经SDS-PAGE电泳得到1个电泳条带,蛋白相对分子质量约为36.1 kDa。经斑点免疫法检测该组分显示具有强烈的过敏原活性,确定了从虾提取过敏原蛋白的工艺参数。用纯化的虾过敏原蛋白,对6-8周龄的雌性Balb/c小鼠短程免疫,间接ELISA法检测抗血清效价及其交叉反应性,结果显示,该短程免疫法仅用19天便可制得效价为1:6400的抗血清;该抗血清对南美白对虾、黑斑口虾姑和中国明对虾的过敏原无交叉反应性;该抗血清经硫酸铵沉淀、DEAE-Cellulose DE-52层析和Sephadex G-150层析分离纯化,最终获得刀额新对虾过敏原的多克隆抗体。用间接ELISA法的原理设计刀额新对虾过敏原的检测方法,确定了虾过敏原的检测区间为0.32μg/mL-16μg/mL。本研究分离纯化了刀额新对虾过敏原蛋白,制备了小鼠抗虾过敏原蛋白的多克隆抗体,并建立了虾过敏原的检测方法,为虾及其制品中致敏物质的检测技术提供了可行的方法。