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蜘蛛果为《贵州省中药材、民族药材质量标准》研究增补品种，来源于桔梗科轮钟花属植物轮钟花Campanumoea lancifolius(Roxb.)Merr.的干燥根，为贵州苗族、布依族等少数民族常用药物，具有补虚益气，祛瘀止血，散结止痛等功效，用于治疗气虚乏力，跌打损伤，肠绞痛等。在贵州民间，除了使用轮钟花的根作为“蜘蛛果”入药，还将其茎叶入药使用，具有益气补虚，祛淤止血，散结止痛等功效。部分地区还采摘其成熟果实作为水果食用。
本文以蜘蛛果药材为研究对象，按照《中国药典》中药质量标准研究制定技术要求，依照2015年版《中国药典》四部通则0212、0502、0832、2201、2302、0401，采用石蜡切片、粉末制片、薄层色谱等方法进行蜘蛛果根的性状鉴别、显微鉴别及薄层色谱鉴别研究;测定药材中浸出物、水分、总灰分和酸不溶性灰分的含量;采用比色法建立蜘蛛果根中多糖的含量测定方法。同时，参照2015年版《中国药典》四部通则0512，采用高效液相色谱法进行不同入药部位(根及茎叶)的指纹图谱研究，并比较两者的差异;采用“一测多评法”建立蜘蛛果药材茎叶中绿原酸、木犀草素及芹菜素的多指标含量测定方法。另外，进行了蜘蛛果根中多糖对RAW264.7细胞增殖及免疫活性作用的初步研究;采用CCK-8法初步探索其对H2O2造成的EA.hy926细胞的氧化损伤模型的保护作用;采用MTT法初步筛选其对人宫颈癌细胞株Hela和人肺癌细胞株A549的细胞增殖的抑制作用。主要研究结果如下:
1.蜘蛛果根药材的质量标准研究结果
(1)药材的性状及显微鉴别研究结果:对10批蜘蛛果根药材样品性状和显微特征的研究结果表明，该药材的性状和显微特征比较稳定，可以作为其鉴别依据，其主要鉴别特征为:表面具有众多扭曲细纵皱纹，支根断落处常有黑褐色胶状物，断面有裂隙或放射状纹理;横切面皮层宽广，韧皮部狭窄，有乳管群散在，薄壁细胞含有菊糖，菊糖呈类圆形，长与宽相近，直径22～95μm。
(2)蜘蛛果根药材薄层色谱鉴别结果:以党参炔苷为对照品，硅胶G为固定相，乙酸乙酯-乙醇-水-甲酸(4∶2∶1∶1)为展开剂，10％硫酸乙醇溶液为显色剂，在100℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视，测定了10批蜘蛛果根药材，结果显示:供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(3)蜘蛛果根药材中水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物的含量测定结果:对10批蜘蛛果根药材测定结果显示，水分含量为5.23％～8.37％，平均值为6.66％;总灰分含量为1.62％～10.24％，平均值4.57％;酸不溶性灰分含量为0.10％～0.67％，平均值为0.30％;稀乙醇浸出物含量为35.37％～73.80％，平均含量为49.50％。
(4)蜘蛛果根药材中多糖的含量测定结果:33批蜘蛛果药材的多糖含量为5.75％～91.51％，由于产地，采收时间等原因，多糖含量差异较大。
2.蜘蛛果不同入药部位指纹图谱研究结果
采用HPLC-DAD方法构建蜘蛛果药材的指纹图谱测定方法，测定34批蜘蛛果不同入药部位药材指纹图谱，分别标定其茎叶指纹图谱中有15个共有峰，其根指纹图谱中有5个共有峰。采用“国家药典委员会推荐的中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012版)”进行相似度分析，结果显示蜘蛛果茎叶及根部位中都含有党参炔苷，但茎叶和根的指纹图谱差异较大，主要区别在于色谱峰的数量及含量，茎叶的指纹图谱显示峰容量较大且含量较高。
3.蜘蛛果茎叶中绿原酸、木犀草素、芹菜素含量测定研究结果
根据“一测多评法”建立技术指南，以绿原酸作为内参物，采用一测多评法建立木犀草素、芹菜素的相对校正因子及其色谱峰保留时间差定位，即木犀草素和芹菜素的相对校正因子/保留时间差分别为0.600/24.02、0.526/26.71。并以外标法验证QAMS的准确性和科学性。分析测定31批蜘蛛果茎叶药材结果显示，其中绿原酸、木犀草素、芹菜素的含量分别为0.018％～1.152％，0.011％～0.141‰0.003％～43.034％。
4.蜘蛛果根中多糖部位的活陛初步研究结果
提取并纯化蜘蛛果根的粗多糖，进行其对RAW264.7细胞增殖及免疫调节、H2O2造成的人脐静脉血管内皮融合细胞(EA.hy926)氧化损伤模型的保护作用、对人宫颈癌细胞(Hela)和人肺癌细胞(A549)细胞增殖抑制作用的活性初步研究，结果表明蜘蛛果多糖具有很强的免疫调节活性，主要体现在:①可促进RAW264.7分泌一氧化氮(NO)、白介素-6(IL-6)以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)，刺激RAW264.7产生免疫应答发挥其免疫调节作用，②可促进RAW264.7细胞的增殖(p＜0.05)，可活化、增强巨噬细胞活性等作用，从而发挥增强非特异性免疫的作用;蜘蛛果多糖还能在一定程度上保护H2O2造成的EA.hy926细胞的氧化损伤;人宫颈癌细胞Hela和人肺癌细胞A549的细胞增殖的抑制作用不明显。
综上，本文所建立的蜘蛛果根药材性状、显微及薄层色谱鉴别方法简便易行，准确可靠;暂定蜘蛛果根药材的浸出物不得少于39.60％，水分应小于7.99％，总灰分应小于5.48％，酸不溶性灰分应小于0.36％;并起草了蜘蛛果根药材质量标准草案。建立的蜘蛛果不同入药部位的HPLC指纹图谱鉴别方法;一测多评法测定其茎叶药材中绿原酸、木犀草素、芹菜素的含量，方法简便可行、重现性良好、结果可靠，为蜘蛛果不同入药部位药材质量控制研究提供了实验依据。蜘蛛果多糖具有显著免疫调节及抗氧化活性，为后续的蜘蛛果药材的药效物质基础深入研究提供了理论参考。
本文以蜘蛛果药材为研究对象，按照《中国药典》中药质量标准研究制定技术要求，依照2015年版《中国药典》四部通则0212、0502、0832、2201、2302、0401，采用石蜡切片、粉末制片、薄层色谱等方法进行蜘蛛果根的性状鉴别、显微鉴别及薄层色谱鉴别研究;测定药材中浸出物、水分、总灰分和酸不溶性灰分的含量;采用比色法建立蜘蛛果根中多糖的含量测定方法。同时，参照2015年版《中国药典》四部通则0512，采用高效液相色谱法进行不同入药部位(根及茎叶)的指纹图谱研究，并比较两者的差异;采用“一测多评法”建立蜘蛛果药材茎叶中绿原酸、木犀草素及芹菜素的多指标含量测定方法。另外，进行了蜘蛛果根中多糖对RAW264.7细胞增殖及免疫活性作用的初步研究;采用CCK-8法初步探索其对H2O2造成的EA.hy926细胞的氧化损伤模型的保护作用;采用MTT法初步筛选其对人宫颈癌细胞株Hela和人肺癌细胞株A549的细胞增殖的抑制作用。主要研究结果如下:
1.蜘蛛果根药材的质量标准研究结果
(1)药材的性状及显微鉴别研究结果:对10批蜘蛛果根药材样品性状和显微特征的研究结果表明，该药材的性状和显微特征比较稳定，可以作为其鉴别依据，其主要鉴别特征为:表面具有众多扭曲细纵皱纹，支根断落处常有黑褐色胶状物，断面有裂隙或放射状纹理;横切面皮层宽广，韧皮部狭窄，有乳管群散在，薄壁细胞含有菊糖，菊糖呈类圆形，长与宽相近，直径22～95μm。
(2)蜘蛛果根药材薄层色谱鉴别结果:以党参炔苷为对照品，硅胶G为固定相，乙酸乙酯-乙醇-水-甲酸(4∶2∶1∶1)为展开剂，10％硫酸乙醇溶液为显色剂，在100℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视，测定了10批蜘蛛果根药材，结果显示:供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(3)蜘蛛果根药材中水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物的含量测定结果:对10批蜘蛛果根药材测定结果显示，水分含量为5.23％～8.37％，平均值为6.66％;总灰分含量为1.62％～10.24％，平均值4.57％;酸不溶性灰分含量为0.10％～0.67％，平均值为0.30％;稀乙醇浸出物含量为35.37％～73.80％，平均含量为49.50％。
(4)蜘蛛果根药材中多糖的含量测定结果:33批蜘蛛果药材的多糖含量为5.75％～91.51％，由于产地，采收时间等原因，多糖含量差异较大。
2.蜘蛛果不同入药部位指纹图谱研究结果
采用HPLC-DAD方法构建蜘蛛果药材的指纹图谱测定方法，测定34批蜘蛛果不同入药部位药材指纹图谱，分别标定其茎叶指纹图谱中有15个共有峰，其根指纹图谱中有5个共有峰。采用“国家药典委员会推荐的中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012版)”进行相似度分析，结果显示蜘蛛果茎叶及根部位中都含有党参炔苷，但茎叶和根的指纹图谱差异较大，主要区别在于色谱峰的数量及含量，茎叶的指纹图谱显示峰容量较大且含量较高。
3.蜘蛛果茎叶中绿原酸、木犀草素、芹菜素含量测定研究结果
根据“一测多评法”建立技术指南，以绿原酸作为内参物，采用一测多评法建立木犀草素、芹菜素的相对校正因子及其色谱峰保留时间差定位，即木犀草素和芹菜素的相对校正因子/保留时间差分别为0.600/24.02、0.526/26.71。并以外标法验证QAMS的准确性和科学性。分析测定31批蜘蛛果茎叶药材结果显示，其中绿原酸、木犀草素、芹菜素的含量分别为0.018％～1.152％，0.011％～0.141‰0.003％～43.034％。
4.蜘蛛果根中多糖部位的活陛初步研究结果
提取并纯化蜘蛛果根的粗多糖，进行其对RAW264.7细胞增殖及免疫调节、H2O2造成的人脐静脉血管内皮融合细胞(EA.hy926)氧化损伤模型的保护作用、对人宫颈癌细胞(Hela)和人肺癌细胞(A549)细胞增殖抑制作用的活性初步研究，结果表明蜘蛛果多糖具有很强的免疫调节活性，主要体现在:①可促进RAW264.7分泌一氧化氮(NO)、白介素-6(IL-6)以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)，刺激RAW264.7产生免疫应答发挥其免疫调节作用，②可促进RAW264.7细胞的增殖(p＜0.05)，可活化、增强巨噬细胞活性等作用，从而发挥增强非特异性免疫的作用;蜘蛛果多糖还能在一定程度上保护H2O2造成的EA.hy926细胞的氧化损伤;人宫颈癌细胞Hela和人肺癌细胞A549的细胞增殖的抑制作用不明显。
综上，本文所建立的蜘蛛果根药材性状、显微及薄层色谱鉴别方法简便易行，准确可靠;暂定蜘蛛果根药材的浸出物不得少于39.60％，水分应小于7.99％，总灰分应小于5.48％，酸不溶性灰分应小于0.36％;并起草了蜘蛛果根药材质量标准草案。建立的蜘蛛果不同入药部位的HPLC指纹图谱鉴别方法;一测多评法测定其茎叶药材中绿原酸、木犀草素、芹菜素的含量，方法简便可行、重现性良好、结果可靠，为蜘蛛果不同入药部位药材质量控制研究提供了实验依据。蜘蛛果多糖具有显著免疫调节及抗氧化活性，为后续的蜘蛛果药材的药效物质基础深入研究提供了理论参考。